[发明专利]一种杂合木聚糖酶atxb的制备方法

权利要求书

1.一种杂合木聚糖酶atxb的制备方法，其特征在于：将来源于褐色高温单孢菌木聚糖酶A的连接序列和木聚糖结合域融合在杂合木聚糖酶atx的C-末端，获得杂合木聚糖酶atxb（SED ID NO:2）。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）杂合木聚糖酶基因atxb的构建

以pBS-T atx 载体为模板，X1和X2为引物扩增atx片段；以pBS-T tfx载体为模板，X3和X4为引物扩增xbd片段；以上述atx和xbd为模板，X1和X4为引物，PCR扩增得到杂合木聚糖酶基因atxb（SED ID NO:1）； 

X1：5’- CG?AATTCGCTGTTACATCCAACGAGACCG-3’

X2：5’-GTTGTCACCGCCGCTGGTGCCAGAGGAAATCGTGACACTGGC-3’

X3：5’-GGCACCAGCGGCGGTGACAACCCCG-3’

X4：5’-GC?GGCCGCGTGGTGGTGGTGGTGGTGCT-3’；

（2）采用pBS-T载体体系试剂盒将割胶回收的atxb片段与T载体连接，得到pBS-T atxb 载体；

（3）杂合木聚糖酶基因atxb在毕赤酵母中分泌表达：

pBS-T atxb 载体经EcoR                                                、Not双酶切、割胶回收目的条带，回收的atxb与同样经过双酶切的pPIC9K连接，并转化大肠杆菌，获得的重组表达质粒命名为pPIC9K-atxb；大量提取重组表达质粒，用Bgl限制性内切酶将重组表达质粒pPIC9K-atxb线性化，浓缩线性化重组表达质粒pPIC9K-atxb，电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞，筛选阳性转化子，得到杂和木聚糖酶atxb（SED ID NO:2）。