[发明专利]一种蓝鳃太阳鱼遗传多样性分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种蓝鳃太阳鱼遗传多样性分析方法。

背景技术

蓝鳃太阳鱼隶属鲈形目太阳鱼科，原产于北美，是一种肉味鲜美、易起捕、可观赏、适温较广的名贵小型淡水鱼类。六十年代除由北美移入日本，现已在日本内陆流域的许多湖泊形成了蓝鳃太阳鱼的自然种群。1987年，中国水产学会从日本引进太阳鱼并于1999年人工繁殖成功，现已作为优质鱼类进行推广。蓝鳃太阳鱼是多次产卵鱼类，多年的累代繁育与养殖，可能导致养殖太阳鱼的遗传多样性降低。因此，很有必要对中国现有太阳鱼的种群结构、遗传多样性现状进行分析。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种蓝鳃太阳鱼遗传多样性分析方法来分析不同地域群体内繁殖所得的子代群体和群体间繁殖所得子一代群体的遗传多样性，以适应养殖业发展的要求，开展蓝鳃太阳鱼育种工作。

为了达到以上目的，本发明采用的技术方案是：一种蓝鳃太阳鱼遗传多样性分析方法，它包括以下步骤：

（1）从尾静脉采血，提取基因组DNA；

（2）测定DNA完整性和浓度；

（3）利用随机引物进行PCR反应；

（4）扩增产物电泳分离；

（5）根据迁移率计算各群体遗传变异的各个参数。

进一步地，步骤1中，采集的血样使用蛋白酶K消化12小时以上。

更进一步地，步骤1中，用酚氯法提取基因组DNA。

进一步地，步骤2中，提取的DNA样本用琼脂糖凝胶电泳进行电泳，电泳完成后通过紫外分光光度计检验DNA完整性和浓度。

更进一步地，步骤4中，扩增产物在2±0.5％的琼脂糖进行电泳，分离不同分子量大小的DNA片段。

进一步地，步骤5中，根据迁移率计算各群体遗传变异的各个参数，其实现过程如下：

根据电泳结果，迁移率相同的都视为同一位点，有带的记为1，无带的记为0，将电泳图转化为0、1矩阵，根据RAPD扩增结果所统计的数据，计算各群体遗传变异的各个参数，

多态位点比例P的计算公式：                                               ，

群体内和群体间的遗传相似系数的计算公式：，

其中，N_xy是个体(地理群体)x、y的共有条带数；N_x和N_y分别是个体(地理群体)x和y的扩增条带数，平均遗传相似系数通过群体内和群体间各个体间的相似系数平均而求得。

群体内和群体间的遗传距离计算公式：D=1-S，

Nei基因多样性指数 (He)^[12]：，

其中，p_i为第i个位点在群体中出现的频率，n为所测位点总数。

通过采用以上技术方案，本发明一种蓝鳃太阳鱼遗传多样性分析方法，实现蓝鳃太阳鱼遗传多样性分析，采用本技术分析蓝鳃太阳鱼遗传多样性，速度快、准确率高、效果好。

具体实施方式

下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。

本实施例中的一种蓝鳃太阳鱼遗传多样性分析方法，包括以下步骤：

（1）从尾静脉采血，提取基因组DNA；

（2）测定DNA完整性和浓度；

（3）利用随机引物进行PCR反应；

（4）扩增产物电泳分离；

（5）根据迁移率计算各群体遗传变异的各个参数。

各步骤具体实施方式如下：

1、从尾静脉采血，提取基因组DNA：