[发明专利]一种检测MGMT活性的化学发光检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶活性的化学发光检测试剂盒，主要包括：

试剂1：链霉亲和素磁珠浓度为1~5mg/mL的分散液，溶剂为含有0.5%牛血清白蛋白、1%酪蛋白的pH 7.2、0.02mol/L的磷酸盐缓冲液；

试剂2：生物素标记的O⁶-苄基鸟嘌呤溶液，使用时以含有叠氮钠0.2g/L、BSA1.0g/L的pH 7.2、0.02mol/L的磷酸盐缓冲液稀释至浓度为5μg/mL；

试剂3：辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的抗人MGMT特异性单克隆抗体，使用时以含有0.05%甘油和0.2g/L的硫柳汞的防腐剂溶液稀释至浓度为2μg/mL；

试剂4：O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶标准品溶液，溶剂为含有0.5%牛血清白蛋白、1%酪蛋白的pH 7.2、0.02mol/L的磷酸盐缓冲液；

试剂5：发光底物液，为过氧化氢-鲁米诺发光液或者AMPPD溶液；

试剂6：浓缩洗涤液，为含有0.1%~0.5%吐温-20、0.1%叠氮化钠的磷酸盐缓冲溶液，pH 7.4，使用时蒸馏水稀释20倍。

2.利用如权利要求1所述的试剂盒对O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶进行检测的方法，所述方法包括：

（1）提取待测样品的总蛋白质；

（2）向试管中加入25μL上述处理后的样品蛋白质，再加入50μL试剂2，37℃恒温振荡反应30min，加入50μL试剂1，37℃恒温振荡反应5min后，将试管架置于磁分离器上分离5min，然后倒出上层清夜；往试管中加入500μL试剂6，充分洗涤2~3次后，置于磁分离器上分离5min，除去上清液，再加入50μL试剂3，37℃恒温振荡反应5min后，将试管架置于磁分离器上分离5min，然后倒出上层清夜，加入500μL试剂6，充分洗涤2~3次后，置于磁分离器上分离5min，除去上清，加入300μL试剂5，充分混匀后，暗处放置2min后置于磁分离器，待所有磁性微球富集于试管底部后，置于化学发光仪测定，获得其发光值；

（3）取梯度浓度的试剂4，按照步骤（2）的方法分别测定其发光值，以所获得的每个浓度标准溶液的平均值（RLU）减去浓度为0的标准品溶液的发光值（RLU₀），再取对数值作为纵坐标，以标准品溶液浓度的自然对数值为横坐标，绘制标准曲线；

（4）根据样品溶液的发光值，按照步骤（3）计算方法取对数值，对照标准曲线，即获得样品中的MGMT含量。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述待测样品为临床组织样品或临床细胞株样品。