[发明专利]一种β-葡萄糖苷酶活性快速测定试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种β-葡萄糖苷酶活性快速定量检测试剂盒，其特征在于，包括R1、R2、R3、R4试剂，其中R1试剂为100-300mmol/L醋酸钠缓冲液pH5-6；R2试剂为10-20mmol/L对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷(pNPG)水溶液；R3试剂为200-400mmol/L碳酸钠溶液；R4试剂为10-30mmol/L对硝基苯酚储备液。其中所述的生色剂为对硝基苯酚，所述的缓冲液为醋酸缓冲液。

2.权利要求1所述的β-葡萄糖苷酶活性定量检测试剂盒在检测β-葡萄糖苷酶发酵液酶活性中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于包括如下步骤：

1)样品制备：

将发酵液通过3000～5000rpm离心10～20min，所获得的上清液既是或将精制固体酶碾碎定容。

2)标准曲线的绘制：

依次移取一定量的对硝基苯酚标准贮备液，用碳酸钠溶液定容至100-200mL，配成相应浓度的对硝基苯酚标准工作液；吸取1-3mL对对硝基酚标准溶液于试管中，加入1-3mL醋酸钠缓冲液；对照的空白试管中加入1-3mL醋酸钠缓冲液；在所有的试管中加入5-10mL碳酸钠溶液，振荡，在405nm处测定吸光度OD值；绘制标准曲线图。

3)样品的检测

向制备好的发酵液或精制固体酶制剂样品溶液加入20-40μL R1缓冲液混匀并加20-30μL入蒸馏水，在40-60℃下孵育，随即加入20-40μL R2试剂，在40-60℃下进行酶促反应，最后加入预冷的试剂100-200μL R3终止反应，并将反应产物在酶标仪或分光光度计上进行检测；

酶活性单位U定义：在上述反应条件下，每分钟释放出1μmol的对硝基酚所需的酶量定义为一个酶活性单位；

样品中β-葡萄糖苷酶活性(U/L)

式中：

Ax——样品酶液的吸光度OD值；

Ao——对应酶液的空白吸光度OD值；

K——对硝基酚的标准曲线的斜率；

Co——对硝基酚的标准曲的截距；

Df——稀释倍数；

V——反应添加的酶液体积L；

T——反应时间min；

X——试样β-葡萄糖苷酶的活力，U/L。