[发明专利]弥漫性大B细胞淋巴瘤分子标记物检测方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属生物学和医学检验领域，涉及一组肿瘤分子标记物及其临床应用。具体而言，涉及弥漫性大B细胞淋巴瘤的分子分型标记物、检测方法及该检测方法涉及的试剂盒。

背景技术

弥漫性大B细胞淋巴瘤（Diffuse Large B-Cell Lymphoma，DLBCL）是目前最常见的成人非霍奇金淋巴瘤，是一种具有高侵袭性、生长迅速的肿瘤。占西方国家成人非霍奇金淋巴瘤的30％～40％¹。目前，我国非霍奇金淋巳瘤的发病率约为4/10万，并以每年2-3%的速度增长，其中DLBCL最为常见，约占每年所有淋巳瘤的50%，因此，每年全国新发病例约为2-3万。2008年WHO分类将DLBCL定义为：大的肿瘤性B淋巴细胞呈弥漫性生长，肿瘤细胞的核与正常组织细胞的核相近或大于组织细胞的核，细胞大小不小于正常淋巴细胞的两倍²。研究表明DLBCL在病理形态学、免疫学表型、基因表达等方面均具有较高的异质性，越来越多的证据显示其可能并不是一个真正独立的病种。正是由于DLBCL具有显著的生物学异质性，病人对治疗的反应差异显著，常规的CHOP联合化疗方案(环磷眈氨、阿霉素、长春新碱和泼泥松)只能使约40%的患者获得长期缓解。随着人鼠嵌合性抗CD20单克隆抗体(利妥昔单抗，Rituximab)联合化疗(R-CHOP)的应用，进一步提高DLBCL的临床疗效，但仍有30-40%的患者对治疗无效或治疗后迅速复发，疾病进展快，预后差。因此，研究DLBCL不同亚型的生物学特性，制定相应的治疗方案成为目前DLBCL的研究热点。当前评价DLBCL患者的预后主要依赖临床参数，最常用的是国际预后指数(international prognostic index，IPI)，包括年龄、功能状态、血清乳酸脱氢酶水平、累及结外部位的数量以及AnnArbor分期等5个临床特征³。由于这种评价方式仅是一些临床指标的结合，并不能很好地反映肿瘤发生过程中内在的分子生物学特征。因此，对相当一部分患者的预后不能进行准确评价，具有相同IPI值的患者治疗后可能呈现完全不同的生存状况，一些被分在低危、低中危组的病人5年生存率仍仅有32%。

近年来，基于基因表达谱的研究大大加深了对DLBCL的认识，也使在分子水平上对其进一步分类、诊断及预后判断成为可能。2000年，Alizadeh等⁴首次使用基因芯片技术检测DLBCL的基因表达图谱，将肿瘤细胞依据基因表达模式的不同分为两类：生发中心B细胞(germinal center B-cell)和活化的外周血B细胞(activated B-cell)。由此将DLBCL分成两型，I型显示生发中心B细胞表达标记，即GCB-DLBCL；II型显示活化的外周血B细胞表达标记，即ABC-DLBCL。随后，Rosenwald等人在240例的大样本研究中证实了上述结果⁵，并且提出了第三类肿瘤细胞的起源，此类肿瘤并不高表达上述两种细胞的特征基因，将此型命名为第三型DLBCL，即Type3-DLBCL。但这部分患者是否是独立的一型DLBCL还存在争议，有待进一步的研究证明。国内外众多的研究结果证实，DLBCL分子亚型是独立于IPI的预后评价指标，针对各个亚型CHOP联合化疗方案的疗效各不相同^4-6。生存分析显示ABC和GCB五年生存率分别为31％和59％，GCB型生存率明显好于ABC型。第三型预后情况与ABC型相似。参照DLBCL基因表达谱分型的结果，一些研究组利用组织芯片(TMA)以及免疫组化(IHC)等方法区分DLBCL亚型．其中具有代表性的有Hans模型、Muris模型和Amen等人提出的分类模型^7-9。