[发明专利]转基因大豆分子标准样品、其建立方法及应用无效
| 申请号: | 201210173356.6 | 申请日: | 2012-05-30 |
| 公开(公告)号: | CN102690835A | 公开(公告)日: | 2012-09-26 |
| 发明(设计)人: | 曹际娟;徐君怡;曹冬梅;郑秋月 | 申请(专利权)人: | 曹际娟;徐君怡;曹冬梅;郑秋月 |
| 主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12Q1/68 |
| 代理公司: | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人: | 贾汉生 |
| 地址: | 116001 辽*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 转基因 大豆 分子 标准 样品 建立 方法 应用 | ||
1.一种转基因大豆GTS 40-3-2标准样品,其特征在于,其按照如下方法制备:
①以转基因大豆GTS 40-3-2的基因组为模板,分别以SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5为引物,PCR扩增,得到两个目的片段;
PCR扩增条件:94℃预变性3.0min;94℃变性0.4min,55℃退火1min,72℃延伸1min,35个循环;72℃ 5min;
②将步骤①扩增的两个目的片段通过人工合成连接在一起之后,再连入质粒载体pMD19-T中;并转化至JM109感受态细胞中,获得重组菌株;
③将步骤②获得的重组菌株提取质粒,进行测序鉴定,鉴定结果以碱基序列中包含序列SEQ ID NO:7的质粒所对应的重组菌株为阳性菌株;
④大量提取步骤③所述阳性菌株的质粒,用Hind-III限制性内切酶进行线性化后分装,获得转基因大豆GTS 40-3-2标准样品。
2.一种转基因大豆GTS 40-3-2的Real-Time PCR检测试剂盒,其特征在于,包括转基因大豆GTS 40-3-2检测基因和阳性标准对照品,
Ⅰ.转基因大豆GTS 40-3-2检测基因,包括:
GTS 40-3-2品系特异性的引物和探针序列:
正向引物:SEQ ID NO:1
反向引物:SEQ ID NO:2
探针:SEQ ID NO:3
大豆内源Lectin基因的引物和探针序列:
正向引物:SEQ ID NO:4
反向引物:SEQ ID NO:5
探针:SEQ ID NO:6
Ⅱ.所述的阳性标准对照品是权利要求1所述的转基因大豆GTS 40-3-2标准样品。
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