[发明专利]转基因大豆分子标准样品、其建立方法及应用无效

专利信息
申请号: 201210173356.6 申请日: 2012-05-30
公开(公告)号: CN102690835A 公开(公告)日: 2012-09-26
发明(设计)人: 曹际娟;徐君怡;曹冬梅;郑秋月 申请(专利权)人: 曹际娟;徐君怡;曹冬梅;郑秋月
主分类号: C12N15/63 分类号: C12N15/63;C12Q1/68
代理公司: 大连东方专利代理有限责任公司 21212 代理人: 贾汉生
地址: 116001 辽*** 国省代码: 辽宁;21
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摘要:
搜索关键词: 转基因 大豆 分子 标准 样品 建立 方法 应用
【权利要求书】:

1.一种转基因大豆GTS 40-3-2标准样品,其特征在于,其按照如下方法制备:

①以转基因大豆GTS 40-3-2的基因组为模板,分别以SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5为引物,PCR扩增,得到两个目的片段;

PCR扩增条件:94℃预变性3.0min;94℃变性0.4min,55℃退火1min,72℃延伸1min,35个循环;72℃ 5min;

②将步骤①扩增的两个目的片段通过人工合成连接在一起之后,再连入质粒载体pMD19-T中;并转化至JM109感受态细胞中,获得重组菌株;

③将步骤②获得的重组菌株提取质粒,进行测序鉴定,鉴定结果以碱基序列中包含序列SEQ ID NO:7的质粒所对应的重组菌株为阳性菌株;

④大量提取步骤③所述阳性菌株的质粒,用Hind-III限制性内切酶进行线性化后分装,获得转基因大豆GTS 40-3-2标准样品。

2.一种转基因大豆GTS 40-3-2的Real-Time PCR检测试剂盒,其特征在于,包括转基因大豆GTS 40-3-2检测基因和阳性标准对照品,

Ⅰ.转基因大豆GTS 40-3-2检测基因,包括:

GTS 40-3-2品系特异性的引物和探针序列:

正向引物:SEQ ID NO:1

反向引物:SEQ ID NO:2

探针:SEQ ID NO:3

大豆内源Lectin基因的引物和探针序列:

正向引物:SEQ ID NO:4

反向引物:SEQ ID NO:5

探针:SEQ ID NO:6

Ⅱ.所述的阳性标准对照品是权利要求1所述的转基因大豆GTS 40-3-2标准样品。

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