[发明专利]转基因玉米标准样品、其建立方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于转基因食品检测技术领域，具体涉及转基因玉米MIR162的标准样品制备、其建立方法及其在检测转基因玉米MIR162中的应用。 

背景技术

玉米是世界上重要的粮食作物之一，其单位面积产量位居榜首。世界范围内玉米害虫高达350多种，其中以鳞翅目的玉米螟分布最广、危害最重，是世界性的重要玉米害虫，其严重影响着玉米的产量和品质。近十多年来，转基因植物培育取得突破，推出了一批新品种，在改善农作物生产中发挥了明显的作用，也显露出巨大的潜力。然而，人们对转基因玉米的安全性存在着很多的争论。面对生物基因工程技术对我国经济利益带来的冲击和国外转基因产品对生态环境和消费者可能带来的风险，对转基因玉米进行检测具有重要的现实意义。2009年，我国已经解除了对玉米进口的限制，大批量的玉米已经涌入中国。这势必对我国的农业安全带来冲击。 

开展转基因成分检验标准样品的研制在保证测试结果的可比性和溯源性，保障食品安全，解决贸易争端，促进经济发展等方面均具有重要的意义。 

在所有的商品化的转基因作物中，转基因玉米的品系最多，共有28个品系。我国尚未批准进境的转基因玉米品系有7种：MIR162品系，MON 89034品系，DBT418品系，LY038品系，ES3272品系，Bt10品系，DP98140品系。2010年我国深圳等口岸已陆续截获违禁品系,MIR162品系就是其中的一种。转基因玉米MIR162是先正达种苗公司的产品，在美国被批准食用的时间为1997年，在加拿大被批准食用的时间为1997年，在澳大利亚被批准食用的时间为2002年。转基因玉米MIR162所含的外源基因有：1）抗鳞翅目昆虫基因vip3Aa20，2）选择性标记基因pmi。 

国内很多检测机构开始大量地开展玉米中转基因成分的检测，但国内外市场却始终没有转基因MIR162品系的标准样品。 

发明内容

鉴于国内转基因MIR162品系标准样品紧缺的状况，我们研制了转基因玉米MIR162品系标准样品，本项标准样品的制备完成，对全面深入的研究解决转基因成分检测标准样品的制备技术和稳定性保证技术，积极开展我国转基因产品检测标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意义。 

转基因玉米MIR162品系简介： 

转基因玉米MIR162所含的外源基因有：1）抗鳞翅目昆虫基因vip3Aa20，2）选择性标记基因pmi。质粒图谱如图1： 

本发明通过以下技术路线实现： 

本发明的一方面在于：转基因玉米MIR162标准样品的制备方法，其具体步骤如下： 

（1）将原料研磨成粉末，过100目筛，将过筛后的粉末收集，向粉末中加入等质量的水，搅拌均匀后，静置1h，弃上清，将沉淀物制备成冻干粉； 

（2）以转基因玉米MIR162为原料，按照步骤（1）所述方法制备的冻干粉为添加原料； 

（3）以非转基因玉米为原料，按照步骤（1）所述方法制备的冻干粉为基质原料； 

（4）将步骤（2）制备的添加原料与步骤（3）制备的基质原料按1∶100的重量比例混合，向混合粉末中加入等质量的水，搅拌均匀后，静置1h，弃上清，将沉淀物制备成冻干粉并分装,0℃~4℃贮存； 

上述步骤（1）~（4）中任一项所述的冻干，其具体步骤如下： 

冷冻干燥程序： 

①样品预冻：先把样品在-80℃冷冻2h； 

②冷冻过程：关好冰冻干燥机的干燥室门，开始干燥室制冷；干燥室温度降至-35℃时，开始冷却阱制冷；冷却阱制冷温度降至-40℃时，将步骤①处理的样品迅速放入干燥室内，关好干燥室门；启动真空泵开始抽真空；当真空度降至0.5Torr时，结束冷冻过程； 

③样品干燥：干燥室的温度设置为15℃,当真空度降至0.1Torr时，样品已干燥好； 

④关闭真空泵，使干燥室与外界大气相通，待内外气压平衡后，打开干燥室门，取出样品，迅速旋紧瓶盖。 

混合粉状样品按以上冷冻干燥程序制成冻干粉，即转基因玉米粉状标准样品；分装后的样品加贴唯一性标识，放置于-20℃中避光贮存。 

本发明的另一方面在于：公开一种转基因玉米MIR162的Real-Time PCR检测试剂盒，包括转基因玉米MIR162检测基因和阳性标准对照品，其中， 

阳性标准对照品：是利用上述方法制备的转基因玉米MIR162标准样品； 

转基因玉米MIR162检测基因，包括：