[发明专利]同步检测10种转基因玉米品系的试剂盒、及其使用方法无效
| 申请号： | 201210172121.5 | 申请日： | 2012-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN102719533A | 公开（公告）日： | 2012-10-10 |
| 发明（设计）人： | 徐君怡;曹际娟;赵昕;曹冬梅 | 申请（专利权）人： | 徐君怡;曹际娟;赵昕;曹冬梅 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 贾汉生 |
| 地址： | 116001 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 同步 检测 10 转基因 玉米 品系 试剂盒 及其 使用方法 | ||
1.一种转基因玉米品系检测试剂盒，其特征在于：包括锁式探针序列SEQ ID NO：1~10中至少一种。
2.根据权利要求1所述的一种转基因玉米品系检测试剂盒，其特征在于：包括锁式探针序列SEQ ID NO：1~10中至少一种以及SEQ ID NO：11~12中至少一种。
3.根据权利要求2所述的一种转基因玉米品系检测试剂盒，其特征在于：包括锁式探针序列SEQ ID NO：1~10以及SEQ ID NO：11~12中至少一种。
4.根据权利要求3所述的一种转基因玉米品系检测试剂盒，其特征在于：包括下述锁式探针序列SEQ ID NO：1~12。
5.如权利要求1~4中任一项所述的一种转基因玉米品系检测试剂盒，其特征在于：还包括通用引物SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14。
6.一种同步检测转基因玉米品系的方法，其操作步骤包括：
①将待测转基因玉米品系的干燥种子研磨成粉末，分别提取基因组DNA；
②基因组DNA的消化
取步骤①获得的基因组DNA 1500ng，于37℃过夜消化；再95℃加热10min使酶失活；其中，消化反应的体系为：
1500ng步骤①获得的基因组DNA，10μL的1×NEB4缓冲液，终浓度为0.33U/μL的SmaI，终浓度为0.33U/μL的NheI，终浓度为0.33U/μL的EcoRI，终浓度为0.1μg/μL的BSA，蒸馏水补充终体积为30μL；
③锁式探针连接
取步骤②获得的产物4μL；2μL的1×Taq DNA连接缓冲液，1μL的1U Taq DNA连接酶，25pM的锁式探针1μL，用蒸馏水补充终体积为10μL；其中，所述的锁式探针为SEQ ID NO：1~12中至少一种；
反应条件：94℃5min;95℃30s,65℃5min，进行30个循环；使其环化；
④实时荧光PCR反应：
步骤③所得的产物5μL；
通用引物SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14分别200nM；
反应条件：95℃,3min;95℃,10s;60℃,15s;72℃20s；40个循环；95℃5min。
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