[发明专利]检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法

权利要求书

1.检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.用终浓度为1～200μM的花色苷处理靶细胞，得处理靶细胞；

b.将步骤a所得处理靶细胞先用PBS洗涤，再用胰蛋白酶消化，计数细胞，然后破碎细胞，最后离心收集上清液，备用；

c.将步骤b所得上清液用氮气干燥，干燥后溶于pH=3～3.5的甲醇溶液中，测定在最大接收波长的荧光强度；

d.准确称取花色苷，溶于pH=3～3.5的甲醇溶液中，配置成浓度梯度的标准液，然后测定标准液在最大接收波长的荧光强度，根据标准液浓度和荧光强度绘制标准曲线；然后根据标准曲线计算步骤c所得荧光强度的花色苷浓度，用生物利用度=花色苷浓度×样品体积计算花色苷在靶细胞的生物利用度。

2.根据权利要求1所述检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步骤a是将花色苷溶于pH=3的甲醇溶液中，然后加入靶细胞中至花色苷终浓度为1～200μM，在37℃、100%饱和湿度、体积分数为5%的CO₂培养箱中培养至少1小时。

3.根据权利要求2所述检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步骤a是用终浓度为50-200μM的花色苷处理靶细胞。

4.根据权利要求1所述检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步骤b中，所述胰蛋白酶消化是用质量分数为0.25%～0.5%的胰蛋白酶消化。

5.根据权利要求1所述检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法，其特征在于：所述破碎细胞为在功率为100W的超声破碎仪中超声至少10分钟；所述离心为在温度为4℃、12000转/分钟条件下离心10分钟。

6.根据权利要求1所述检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步骤b中，所述胰蛋白酶消化后，还包括如下步骤，离心收集收集细胞，加入1mL，pH=3.0的甲醇溶液重悬细胞，准确收集1×10⁶个细胞。

7.根据权利要求1所述检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法，其特征在于：所述步骤d中，所述浓度梯度的标准液是将花色苷溶于pH=3的甲醇溶液，配制成花色苷浓度分别为0.1μM，1μM，5μM，10μM，20μM，40μM，80μM，160μM和320μM的标准液。

8.根据权利要求1-7任一项所述检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法，其特征在于：所述靶细胞为血管内皮细胞，小肠上皮细胞，肝细胞或肿瘤细胞。

9.根据权利要求8所述检测花色苷在靶细胞生物利用度的方法，其特征在于：所述花色苷为飞燕草素或矢车菊素。