[发明专利]一种鉴定中外猪种的方法

权利要求书

1.用于鉴定中外猪种的遗传标记，其特征在于，其位于猪CYB5基因5'启动子区上，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，根据该序列中SNP位点的不同来鉴定中国猪种和国外猪种，所述SNP位点为位于CYB5基因起始密码子上游-660bp、-380bp或-69bp中的一个或多个；

其中，中国猪种CYB5基因启动子序列中-660bp、-380bp、-69bp处碱基分别为单碱基缺失、C、T，国外猪种CYB5基因启动子序列中-660bp、-380bp、-69bp处碱基分别为G、T、C。

2.一种鉴定中外猪种的方法，其特征在于，根据待测猪CYB5基因启动子的SEQ ID No.2所示序列中SNP位点的不同来鉴定中国猪种和国外猪种，所述SNP位点为位于CYB5基因起始密码子上游-660bp、-380bp或-69bp中的一个或多个；

其中，中国猪种CYB5基因启动子序列中-660bp、-380bp、-69bp处碱基分别为单碱基缺失、C、T，国外猪种CYB5基因启动子序列中-660bp、-380bp、-69bp处碱基分别为G、T、C。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测猪的基因组DNA；

2)以待测猪的基因组DNA为模版，利用特异性引物对扩增包括待测猪CYB5基因启动子序列中不同SNP位点的片段；

其中，所述SNP位点为位于CYB5基因起始密码子上游-660bp、-380bp或-69bp中一个或多个；

3)检测PCR扩增产物。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述引物对为：

i)上游引物5’-AAGGAGGAGGTAAGCAATG-3’和下游引物5’-GAGATGAGCGGAACAGAGT-3’；或

ii)上游引物5’-TGGGTCAACAGCGAGATA-3’和下游引物5’-CCTCCGTAGAACGAGTGTA-3’；或

iii)上游引物5’-CGCCTGCCACAATGAACC-3’和下游引物5’-GCGCAGAAGGGGATGATG-3’；或

iv)上游引物5’-TGAGCGGAACAGAGTGGG-3’和下游引物5’-AATCATCGGAGGTCGTGC-3’。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤3)所述检测PCR扩增产物的方法为：

步骤2)中扩增使用的引物对为i)或ii)，检测扩增产物的方法为测序；

步骤2)中扩增使用的引物对为iii)，检测扩增产物的方法为焦磷酸测序；或

步骤2)中扩增使用的引物对为iv)，检测扩增产物的方法为RFLP检测。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，当步骤2)中扩增使用的引物对为iii)时，对扩增产物进行焦磷酸测序时使用的测序引物为5’-TGGAGTGGCTGGCGA-3’。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，当步骤2)中扩增使用的引物对为iv)时，用限制性内切酶FspBI酶切扩增产物，并对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，电泳结果呈现2条带的为中国猪种，仅为1条带的为国外猪种。

8.用于鉴定中外猪种的PCR引物，其包括以下引物中的一对或多对：

i)上游引物5’-AAGGAGGAGGTAAGCAATG-3’和下游引物5’-GAGATGAGCGGAACAGAGT-3’；

ii)上游引物5’-TGGGTCAACAGCGAGATA-3’和下游引物5’-CCTCCGTAGAACGAGTGTA-3’；

iii)上游引物5’-CGCCTGCCACAATGAACC-3’和下游引物5’-GCGCAGAAGGGGATGATG-3’；或

iv)上游引物5’-TGAGCGGAACAGAGTGGG-3’和下游引物5’-AATCATCGGAGGTCGTGC-3’。

9.含有权利要求8所述引物的用于鉴定中外猪种的试剂盒。

10.权利要求1所述用于鉴定中外猪种的遗传标记在猪分子标记辅助育种中的应用。