[发明专利]一种毛竹体细胞胚胎发生的方法

说明书

技术领域

本发明涉及林木生物技术和组织培养领域，特别涉及到毛竹体细胞胚胎发生。

背景技术

二十世纪80年代以来，随着国际上植物生物技术的快速发展，国内外对竹子生物技术研究也逐渐增加，目前国际上和本专利有关的竹子再生体系方面的报道主要有：

1982年Metha等报道了印度刺竹(Bambusa arundinacea)成熟胚诱导出愈伤组织和再生植株(参考文献1)。

1983年Huang和Murashige从刚竹属(Phyllostachy)、箬竹属(Sasa)、簕竹属(Bambusa)的叶片和嫩茎尖诱导出愈伤组织(参考文献2)。

1985年Rao等以牡竹(Dendrocalamus.strictus)成熟种子诱导了愈伤组织，进而再生植株(参考文献3)。

1986年Yeh和Chang用绿竹(B.oldhamii)、吊丝球竹(B.beecheyana)的花序以体细胞胚胎发生方式再生植株(参考文献4、5)。

1987年Hassan等报道了刚竹(Ph.viridis)叶片愈伤组织的植株再生(参考文献6)。

1989年Huang等报道了用绿竹(B.oldhamii)、罗汉竹(Ph.aurea)和箬竹(S.pygmaea)的嫩茎尖进行愈伤组织诱导，仅由BA和NAA诱导的愈伤组织可器官发生，形成再生植株(参考文献7)。

1990年Tsay报道利用麻竹(Sinocalamus latiflora)花药诱导出愈伤组织并实现植株再生(参考文献8)。

2002年Godbole等用版纳甜龙竹(D.hamiltonii)秆芽诱导出愈伤组织并实现植株再生(参考文献9)。

2005年Ogita利用毛金竹(Ph.nigra var.henosis)竹笋诱导出愈伤组织，但愈伤组织容易褐变，没有再生(参考文献10)。

2007年Gillis等利用巴苦竹(B.balcooa)小穗诱导出愈伤组织并建立了高效再生体系(参考文献11)。

2011年Cheah等利用小佛肚竹(B.ventricosa)秆芽诱导出愈伤组织并实现植株再生(参考文献12)。

我国大陆学者在竹子生物技术方面的研究起步较晚。

1991年阙国宁等报导了对黄竹(D.membranceus)和印度刺竹(B.arundinacea)的培养(参考文献13-14)，2008年吴涛等报导了对金丝慈竹(B.affinis‘Viridiflavus’)的培养(参考文献15)，均属经愈伤组织再生竹株的研究，其外植体均为嫩芽。2009年袁金玲等以孝顺竹(B.multiplex)种胚和小穗为外植体诱导出愈伤组织并实现植株再生，以种胚外植体的再生效率较高(参考文献16)。2010年乔桂荣等以麻竹花药为外植体诱导出愈伤组织并获得再生植株(参考文献17)，同年Zhang et al.以版纳甜龙竹的种胚为外植体诱导出愈伤组织并实现植株再生(参考文献18)。2011裴海燕等以雷竹(Ph.violascens)种胚为外植体，脱分化产生愈伤组织，愈伤组织再生出芽(参考文献19)。

就毛竹而言，周宏(2005)、芦娟娟(2006)分别利用毛竹笋芽诱导出愈伤组织，但没有得到再生植株(参考文献20-21)。李楠利用毛竹种子诱导出愈伤组织，但生长较慢、质地疏松，水渍化严重，未能获得再生植株(参考文献22)。岳晋军等研究了不同放置和切割方式对毛竹种胚愈伤组织诱导率和质量的影响，未见实现植株再生(参考文献23)。综上所述，散生竹通过愈伤组织的植株再生体系尚不完善，对毛竹的研究仅处于愈伤组织诱导阶段，均未见获得再生植株。稳定高效的毛竹体细胞胚胎发生体系已经成为制约毛竹生物技术育种的关键技术障碍。

本发明提供了毛竹体细胞胚胎发生的方法，将为毛竹的细胞工程、基因工程以及分子生物学的研究提供技术平台。

主要参考文献

1.Mehta UI，Rao VR，Ram HYM.Somatic embryogenesis in bamboo[C].In Proceeding 5th Interenational Cogress of Plant tissue culture&cell Culture，Tokyo，Japan，1982，109-110