[发明专利]介导ZMIZ1靶向敲除的转录激活子样效应因子核酸酶及其制法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术和基因工程领域，具体地，本发明涉及介导ZMIZ1靶向敲除的转录激活子样效应因子核酸酶及其制法和应用。

背景技术

ZMIZ1(GeneID:57178)，又称MIZ、RAI17、ZIMP10、hZIMP10，是一个位于人第十号染色体(10q22.3)上的基因。该基因编码的PIAS(protein inhibitor of activated STAT)对多种转录因子（如雄性激素受体(AR)，Smad3/4、和P53）和类泛素化过程具有调控作用。已有研究表明，10号染色体上的该基因位点与9号染色体上的酪氨酸蛋白激酶(ABL1)位点发生染色体异位后与急性淋巴细胞白血病有关。

TGF-β在细胞增殖、分化以及凋亡过程中起着重要作用。Smad类蛋白是TGF-β一型受体的组分，并对受体信号与核内基因的引导有作用。PIAS蛋白最开始被认为是JAK-STAT信号通路的转录共调控因子。随着研究的深入，PIAS蛋白被发现在多个细胞过程中与其它信号通路存在交谈(Cross-talk)。重要的是，PIAS蛋白通过调控Smad3的转录活性进而影响TGF-β信号。通过对ZMIZ1，一个新型PIAS-like蛋白，靶向特异性敲出，对于研究ZMIZ1与Smad3之间的相互作用非常重要。

人们一直没有找到简单高效的方法对基因组进行靶向修饰，传统的基因打靶依赖于细胞内自然发生的同源染色体随机交换的基因打靶技术，效率非常低，通常只有10^-6-10^-8，这种打靶方法只在小鼠中得到广泛应用，在其他模式动物及大型哺乳动物中都因效率太低而得不到广泛应用。

因此本领域目前尚无对人ZMIZ1基因进行打靶的成熟技术，因此本领域迫切需要开展对人ZMIZ1基因进行高效打靶的研究。

发明内容

本发明的目的就是提供一种介导ZMIZ1靶向敲除的转录激活子样效应因子核酸酶及其制法和应用。

在本发明的第一方面，提供了一种分离的多肽1，所述的多肽1任选自下组：

(1)具有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的多肽；或(2)与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的多肽同源性≥90%，较佳地≥95%，更佳地≥98%，最佳地≥99%的多肽；

优选地，所述的多肽1具有选自下组的功能：

(1)特异性地识别序列如SEQ ID NO:10所述的核苷酸，或如SEQ ID NO:10所述的核苷酸经一个或多个（较佳地2个）核苷酸取代所衍生的核苷酸；

(2)特异性地识别序列如SEQ ID NO:13所述的核苷酸，或如SEQ ID NO:13所述的核苷酸经一个或多个（较佳地2个）核苷酸取代所衍生的核苷酸。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸1，所述的多核苷酸1选自下组：

(1)编码第一方面所述多肽1的多核苷酸；

(2)具有SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45所示核苷酸序列的多核苷酸；

(3)与SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45所示核苷酸序列的同源性≥90%，较佳地≥95%，更佳地≥98%，最佳地≥99%的多核苷酸；

(4)与上述(1)-(3)互补的多核苷酸。

在本发明的第三方面，提供了一种分离的多肽2，所述的多肽2包括：第一方面所述的多肽1，和位于所述多肽1两端的转录激活子样效应因子氨基酸序列框架的N端和C端；

优选地，所述转录激活子样效应因子氨基酸序列框架的N端和C端为天然的或人工改造的序列；

较佳地，所述的多肽2任选自下组：

(1)具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的多肽；或

(2)与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的多肽同源性≥90%，较佳地≥95%，更佳地≥98%，最佳地≥99%的多肽。

在本发明的第四方面，提供了一种分离的多核苷酸2，所述的多核苷酸2选自下组：

(1)编码第三方面所述多肽2的多核苷酸；

(2)具有SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:41所示核苷酸序列的多核苷酸；