[发明专利]混合微生物核酸的提取方法

权利要求书

1.一种裂解混合微生物的试剂，由提取液A和提取液B组成；

所述提取液A按照如下方法制备：将Tris、EDTA、SDS、Tween 80、Triton X-100、Brij 58、3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇和水混合，得到提取液A，所述Tris在所述提取液A中的浓度为5-20mM；所述EDTA在所述提取液A中的浓度为5-20mM；所述SDS、所述Tween 80、所述Triton X-100、所述Brij 58、所述3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸、所述十二烷基肌氨酸钠在所述提取液A中的浓度均为0.05%-0.2%（体积百分含量）；所述β-巯基乙醇在所述提取液A中的浓度为0.1-0.5%（体积百分含量）；

所述提取液B按照如下方法制备：将水饱和酚、乙醇、吡咯烷酮混合，得到提取液B，所述水饱和酚、所述乙醇、所述吡咯烷酮的体积比为（99-98）:1:1。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：

所述提取液A和所述提取液B均为独立包装；

所述提取液A的pH值为7.2-7.8，所述提取液A的pH值具体为7.5；

所述提取液B的pH值为5-8，所述提取液B的pH值具体为7.5。

3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于：

所述提取液A中，所述Tris在所述提取液A中的浓度为10mM；

所述EDTA在所述提取液A中的浓度为10mM；

所述SDS、所述Tween 80、所述Triton X-100、所述Brij 58、所述3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸、所述十二烷基肌氨酸钠在所述提取液A中的浓度均为0.1%（体积百分含量）；所述β-巯基乙醇在所述提取液A中的浓度为0.1%（体积百分含量）；

所述提取液B中，所述水饱和酚、所述乙醇、所述吡咯烷酮的体积比为98:1:1。

4.根据权利要求1-3中任一所述的试剂，其特征在于：

所述混合微生物由细菌、病毒、支原体和/或衣原体组成；

所述混合微生物具体由金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）、柯萨奇病毒（Human coxsackievirus）A16和解脲支原体（Mycoplasma urealyticum）组成。

5.一种裂解混合微生物提取核酸的方法，包括如下步骤：

先将权利要求1-4中任一所述的试剂中的所述提取液A、Carrier RNA和混合微生物混合，然后与权利要求1-4中任一所述的试剂中的所述提取液B混合，进行反应，得到反应液；离心收集上层水相，即得到混合微生物裂解液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

所述混合微生物由细菌、病毒、支原体和/或衣原体组成；

所述混合微生物具体由金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）、柯萨奇病毒（Human coxsackievirus）A16和解脲支原体（Mycoplasma urealyticum）组成。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：

所述提取液A、Carrier RNA和所述提取液B的配比为（200-500）μl：(5-20)μg：(200-500)μl，所述提取液A、Carrier RNA和所述提取液B的配比具体为200μl：5μg：200μl。

8.根据权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：

所述反应时间为15分钟-60分钟；所述反应时间具体为60分钟；

所述反应温度为55-80℃；所述反应温度具体为65℃；

所述反应的方式为每间隔5-15秒震荡10-30秒钟；所述反应的方式具体为每间隔15秒震荡30秒钟。

9.根据权利要求5-8任一所述的方法，其特征在于：

所述离心的温度为0-4℃；所述离心的温度具体为4℃；

所述离心的时间为5-10分钟；所述离心的时间具体为5、8或10分钟；

所述离心的转速为10000-15000rpm，所述离心的转速具体为12000rpm，离心半径为10厘米。