[发明专利]杠板归药材指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及中药材的指纹图谱的建立方法，尤其是杠板归药材高效液相色谱（HPLC）指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的杠板归药材的标准指纹图谱。

背景技术

我国传统的中药及其制剂大多缺乏严密的质量标准和科学的检测手段，难以有效的控制其内在质量，不能保证用药的安全、有效，也不符合国际医药市场的要求，严重制约了我国中药行业的发展。加强中药材质量控制研究是中药规范化、标准化的关键问题。只有对中药材进行科学的质量控制，才能保证中药质量，实现中药的“安全、有效、稳定、可控”。

杠板归(Polygonum perfoliatum L.)为蓼科蓼属植物，其以全草入药，性味酸、苦、寒，有小毒，具有清热解毒、利水消肿、清热活血等功效；别名：蛇不过、蛇倒退、猫爪刺、梨头刺等；广布于四川、湖南、贵州等地，生于山谷、灌木丛中或水沟旁；是贵州常用的苗族药材，在民间有广泛应用，在治疗炎症尤其是妇科炎症方面有很好的疗效。它具有较高的药用价值，全株可入药，并且疗效确切，具有很大的开发潜力。杠板归药材成分复杂，主要包括以下几类：黄酮类、蒽醌类化合物、苯丙素类化合物、香豆素类的衍生物、苯丙素类及其他一些常见物质。研究表明，杠板归药材具有一定的药理作用。因此，对其某一种或几种活性成分进行检测，就有失全面，不能真实反映杠板归药效的整体性。要全面有效地控制杠板归及其成方制剂的质量，必须对它的物质群整体予以控制。

中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，指纹图谱对于有效控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。日本汉方药主要生产企业在20世纪80年代就采用高效液相指纹图谱控制质量。德国、法国在对银杏叶提取物的质量控制中亦采用高效液相指纹图谱方法。美国FDA近几年制定的植物草药指南中已经明确把指纹图谱作为混合物质群的质量控制方法。指纹图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已成为国际共识。为了有效控制及评价杠板归药材的质量，使其质量控制技术更加完善、科学，申请人对杠板归乙醇提取物进行了全面系统的指纹图谱研究，建立了杠板归药材乙醇提取物的指纹图谱测定方法。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种杠板归药材指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。本发明通过对杠板归药材HPLC指纹图谱的研究，提供了一种更好的杠板归质量检测方法，弥补了现有质量控制技术的不足，使杠板归药材的质量控制技术更为完善、科学。

本发明的技术方案：杠板归药材指纹图谱的建立方法包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取杠板归药材粉碎，过筛，称取样品，用乙醇加热回流提取1～4次，每次0.5-3小时，然后浓缩，用甲醇定容，过滤，滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：取适量槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；

（3）测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，用高效液相色谱仪测定；将杠板归供试品溶液注入高效液相色谱仪，以0.05%H₃PO₄水溶液为A相、乙腈为B相进行梯度洗脱，洗脱液进入DAD紫外检测器，检测器采集85min的检测数据；

（4）以对照品色谱峰的相对保留时间和峰面积为1，计算供试品色谱峰的相对保留时间和峰面积，用指纹图谱软件对所得的数据和图谱进行处理，即得到杠板归药材标准指纹图谱。

前述方法中，高效液相色谱测定时的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相为B相乙腈和A相0.05%H₃PO₄水溶液；检测波长340nm；流速1mL/min。

前述方法中，供试品溶液的制备过程为：取杠板归药材粉碎过40目筛，准确称取样品1克，加入70%乙醇溶液80mL，置于80℃水浴中，加热回流提取1次、3h，然后浓缩至干，用甲醇定容至25mL，过滤，即得供试品溶液。

前述方法中，对照品溶液的制备为：取槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸两种对照品，分别加入甲醇，制成每1ml分别含10μg槲皮素、10μg槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸的两种对照品溶液。

前述方法的步骤（3）中分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20μL。