[发明专利]一种EMA与PCR结合快速检测饲料中沙门氏菌活细胞的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种EMA与PCR结合快速检测饲料中沙门氏菌活细胞的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括以下成分：沙门氏菌阳性对照、沙门氏菌阴性对照、Taq预混酶及引物混合物、DL Marker 2000、EMA溶液和共价交联曝光装置。

2.根据权利要求1所述的一种EMA与PCR结合快速检测饲料中沙门氏菌活细胞的试剂盒，其特征在于：所述Taq预混酶及引物混合物中，预混酶浓度为20u/mL，引物浓度为100pmol/mL，其保存条件为-20°C。

3.根据权利要求1或2所述的一种EMA与PCR结合快速检测饲料中沙门氏菌活细胞的试剂盒，其特征在于：所述引物的序列为：SE-1：GTGAAATTATCGCCACGTTCGGG；SE-2: CATCGCACCGTCAAAGGAAC。

4.根据权利要求3所述的一种EMA与PCR结合快速检测饲料中沙门氏菌活细胞的试剂盒，其特征在于：叠氮溴化已啶浓度为0.5mg/mL。

5.根据权利要求1所述的一种EMA与PCR结合快速检测饲料中沙门氏菌活细胞的试剂盒，其特征在于：所述共价交联曝光装置包括箱体，所述箱体上设有活动门、卤素灯开关、紫外灯管开关和总电源开关，所述箱体内顶部设有卤素灯，箱体两侧内壁上分别设置有至少一个紫外灯管。

6.根据权利要求5所述的一种EMA与PCR结合快速检测饲料中沙门氏菌活细胞的试剂盒，其特征在于：所述的紫外灯管为两个。

7.根据权利要求5或6所述的一种EMA与PCR结合快速检测饲料中沙门氏菌活细胞的试剂盒，其特征在于：所述箱体上还设有可视窗口。

8.一种EMA与PCR结合快速检测饲料中沙门氏菌活细胞的方法，其特征在于：包括如下步骤： 

1）将饲料样品用BPW肉汤增菌，分别吸取500ul菌悬液于四个1.5mL离心管中，其中两份作为制备好的活细胞菌悬液，两份进行100°C水浴10 min制成死细胞悬浮液；

取活细胞菌悬液及死细胞菌悬液各一份，分别加入4ul 0.5mg/mL的叠氮溴化已啶溶液，摇匀，将其置于冰盒上，在共价交联装置内曝光3min；

2）对四支离心管内的菌悬液分别提取细菌DNA；

3）PCR扩增沙门氏菌invA基因：取试剂盒中预混酶及引物混合物，50ul体系吸取40ul，加入提取的细菌DNA10 ul进行PCR扩增，扩增条件为：94℃预变性5min，94℃变性30sec，56℃退火30 sec，72℃延伸45sec，33个循环，最后72℃终延伸10 min；

4）电泳分析：将PCR产物于1%琼脂糖凝胶上进行电泳，电泳结束后，凝胶成像系统进行成像分析。