[发明专利]一种筛查ALK融合基因的方法无效
| 申请号： | 201210158412.9 | 申请日： | 2012-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN102888452A | 公开（公告）日： | 2013-01-23 |
| 发明（设计）人： | 陈海泉;孙艺华;王瑞;潘云建;胡海川;李晨光;王磊;叶挺;罗晓阳;李航;张扬 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 20003*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 alk 融合 基因 方法 | ||
1.一种筛查ALK融合基因的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
(1)设计筛查ALK融合基因的7对real-time PCR联合引物或探针；
(2)提取样本中的总RNA；
(3)以样本中的总RNA为模板，通过逆转录方法合成cDNA；
(4)在7个real-time PCR反应单位中，以(3)中所得的cDNA为模板，分别加入(1)中设计的7对引物，以及包括荧光染料在内的反应预混液；
(5)在real-time PCR反应仪上进行real-time PCR反应，并分别记录每个样本的7个反应单位的荧光阈值Ct值；
(6)分别计算引物I～IV所在反应体系的Ct值的均值CtABP，和引物V～VII所在反应体系的CT值的均值CtBBP；
(7)计算2-ΔCT，判定样本中是否具有ALK融合基因。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的联合引物对或探针的核苷酸编码序列如SEQ ID NO 1-14所示。
3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(7)中，结果的判定标准为：
相对表达量值2-ΔCT，其中-ΔCT＝-(CtABP-CtBBP)；
有ALK融合基因：2-ΔCT≥12；
无ALK融合基因：2-ΔCT＜12。
4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的ALK融合基因是非小细胞肺癌相关的ALK融合基因。
5.SEQ ID NO 1-14的real-time PCR联合引物对或探针在制备筛查ALK融合基因突变的制剂中的用途。
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