[发明专利]燕麦噬酸菌西瓜亚种的蛋白质指纹图谱模型及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物检测领域，特别是涉及一种燕麦噬酸菌西瓜亚种的蛋白质指纹图谱模型，及该模型在燕麦噬酸菌西瓜亚种检测和鉴定中的应用。 

背景技术

西瓜细菌性果斑病是一种严重危害葫芦科作物的世界性病害，尤其对西瓜和甜瓜危害严重。该病病原菌最早由Schaad等命名为类产碱假单胞菌西瓜亚种（Pseudomonas pseudoalcaligens subsp.citrulli）。1992年，Willems等根据rRNA-RNA和DNA-DNA分子杂交结果，将其改名为燕麦噬酸菌西瓜亚种（Acidovorax avenae subsp.citrulli，简称Aac.）。目前，该病害每年在美国东南部的10多个州都有发生，虽然有的年份发生面积不到5%，但是罹病田的损失可高达90%~100%。由于该病菌可以通过种子传带，已对美国西瓜制种业和种植业造成巨大冲击和威胁。此外，该病先后还在土耳其、澳大利亚、日本、泰国等国家造成危害。1986年以来，我国相继记载和报道了该病在新疆、海南等省的西瓜、甜瓜制种基地和大田生产中发生的危害。 

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测(Matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI TOF MS)中，样品的蛋白分子在飞行管内的飞行速度与m/z^-1/2成正比，不同m/z值的蛋白分子到达检测器的时间不同，从而得到具有不同m/z值的图谱，实现对样品的鉴定。目前尚未有用于检测或鉴定的燕麦噬酸菌西瓜亚种的蛋白质指纹图谱模型，也没有基于该蛋白质指纹图谱模型的检测方法。 

发明内容

本发明的目的是提供一种具有特异性识别燕麦噬酸菌西瓜亚种的蛋白质指纹图谱模型及该模型的蛋白质检测分析数据库，以及该模型或分析系统在燕麦噬酸菌西瓜亚种的检测和鉴定中的应用。 

本发明的另一目的是提供一种燕麦噬酸菌西瓜亚种的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测方法。 

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案： 

本发明公开了一种燕麦噬酸菌西瓜亚种的蛋白质指纹图谱模型，该模型根据多个蛋白质的质荷比及其蛋白质波峰强度系数绘制而成，其中蛋白质的质荷 比（m/z值）分别为3171.4、3735.0、4963.5、5139.0、5866.4、6554.1、7466.1、7948.0、8384.5、9304.2、9504.3、9920.0、10272.8、10840.7、12530.5、12896.5。需要说明的是，上述质荷比的值是一组相对稳定的值，但是，本领域技术人员可以理解，在不同实验条件下，在这些数值的基础上进行的小数点值的变化，或者说在1‰误差范围内个别值进行的数值变化，也属于本申请的保护范围。 

进一步地，蛋白质的质荷比及蛋白质波峰强度系数由基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪的软件统计分析得到。 

本发明还公开了一种包括上述蛋白质指纹图谱模型的蛋白质检测分析数据库。 

本发明还公开了上述蛋白质指纹图谱模型或蛋白质检测分析系统在燕麦噬酸菌西瓜亚种的检测或鉴定中的应用。 

本发明还公开了一种燕麦噬酸菌西瓜亚种的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测方法，包括样品蛋白质芯片制备、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测，以及样品蛋白质图谱比对；其中，样品蛋白质图谱比对是将基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测分析获得的样品蛋白质图谱，与上述的蛋白质指纹图谱模型比较；或者在上述的蛋白质检测分析数据库中比对。 

本发明实施方式的检测方法中，样品蛋白质芯片制备包括释放样品蛋白质的前处理和点样，点样的步骤包括，先在质谱靶芯片上滴加样品上清液，晾干后再滴加基质溶液。 

进一步地，检测方法中，基质溶液的溶剂乙腈：甲醇：无菌去离子水按体积比1：0.8-1.2：0.8-1.2混合而成。 

进一步地，检测方法中，基质溶液的溶质为α-氰基-4-羟基肉桂酸。 

本发明实施方式的检测方法中，释放样品蛋白质的前处理采用的溶剂包括第一溶剂、第二溶剂和第三溶剂中的至少一种；第一溶剂为0.1%的三氟乙酸；第二溶剂为70%的甲酸；第三溶剂为100%乙腈。