[发明专利]构建核酸库的方法、试剂及试剂盒

权利要求书

1.一种随机断裂并同时标记DNA片段的方法，其特征在于，包括以下步骤：

i.转座酶、双链转座子及目标DNA混合后发生反应，就是在转座酶的催化作用下，双链的转座子末端序列随机插入目标DNA序列中，形成被转座子末端序列标记的DNA片段，这些片段从5’至3’，始于双链转座子末端序列，继而是9个碱基对的单链DNA序列，然后是双链目标DNA片段，9个碱基对的单链DNA序列和双链转座子末端；

ii.去除标记在DNA两端的双链转座子末端序列，生成未标记的DNA片段。

iii.在未标记的DNA片断上连接需要的DNA标签，产生一个有新的标签的DNA片段。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，用单链DNA内切酶来去除标记在DNA两端的双链转座子末端序列。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，用单链DNA外切酶来产生带平末端的双链DNA。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，用DNA聚合酶来产生可连接的DNA末端。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，DNA聚合酶为大片断DNA聚合酶I，T7DNA聚合酶或T4DNA聚合酶，或是Taq DNA聚合酶或无3’至5’外切酶活性的Klennow片断。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，未标记的DNA片断被连接上需要的标签是用DNA连接酶来实现的。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，DNA连接酶是T4 DNA连接酶，T7 DNA连接酶，或是Taq DNA聚合酶。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA标签为选自测序标签，barcode标签，酶切位点标记，捕捉标记，检测标记，扩增标记，或转录启动子序列标签中的一种或一种以上。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，多个标签可以连接在一起使用。

10.一种使用权利要求1-9方法的用于随机断裂，并形成有标记的DNA片段的试剂盒，其中包括纯化的转座子，转座子末端，和单链DNA核酸酶，DNA聚合酶，和DNA连接酶以及所需的标签。