[发明专利]一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法及其所用的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法及所用的培养基。

背景技术

紫杉醇(Taxo1)是从红豆杉科红豆杉属（Taxus spp.）植物的树皮中提取的一种天然抗癌紫杉烷类化合物，是目前世界公认的最好的广谱、强活性天然抗癌药。由于红豆杉属植物生长缓慢，紫杉醇含量较低，仅占树皮干质量的0.01% - 0.02%，枝叶干质量的十万分之一左右。因此随着全球对野生红豆杉资源保护措施的不断加强，利用野生资源生产紫杉醇已无可能，而现阶段人工种植的红豆杉资源量还远远不能满足紫杉醇生产的需求量。 

运用植物细胞培养技术对红豆杉愈伤组织进行大规模培养，获取人们需要的活性产物可望成为紫杉醇生产的重要途径。 

发明内容

本发明的目的之一为了解决上述的运用植物细胞培养技术对红豆杉愈伤组织进行大规模培养，获取人们需要的活性产物紫杉醇的问题而提供了一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法。 

本发明的目的之二是提供上述的一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法所用的诱导培养基和继代培养基。 

本发明的技术方案 

一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法，即以南方红豆杉的叶片为外植体，先后分别在诱导培养基和继代培养基中进行愈伤组织的诱导和继代培养后，最终得到红豆杉叶片愈伤组织。

上述的一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法，具体包括如下步骤： 

（1）、外植体的消毒

取当年生南方红豆杉的幼嫩叶片，经流水冲洗，然后依次用酒精、氯化汞消毒, 蒸馏水洗净后获得消毒的红豆杉外植体；

（2）、愈伤组织诱导培养

将步骤（1）所得的消毒的红豆杉外植体接种于诱导培养基上，控制温度为20-22℃条件下暗培养，20天后得到诱导培养后的愈伤组织；

所述的诱导培养基，按每升计算，

由400mg NH₄N0₃、556mg Ca(NO₃)₂.4H₂O、990 mg K₂SO₄、96 mg CaCl₂.2H₂O、170 mg KH₂PO₄、0.25 mg Na₂MoO₄.2H₂O、370 mg MgSO₄.7H₂O、22.4mg MnSO₄.H₂O、8.6mg ZnSO₄.7H₂O、0.25mg CuSO₄.5H₂O、27.8 mg FeSO₄.7H₂O、37.3 mg Na₂-EDTA、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、1mg 吲哚乙酸（IBA）、0.25mg 6-苄基嘌呤（6-BA）、0.5mg 水解酪蛋白（CH）、20 g蔗糖、 8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成；