[发明专利]一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导和继代培养的方法及其所用的培养基

权利要求书

1.一种红豆杉叶片愈伤组织的诱导方法，其特征在于具体包括如下步骤：

（1）、外植体的消毒

取当年生南方红豆杉的幼嫩叶片，经流水冲洗，然后依次用酒精、氯化汞消毒, 蒸馏水洗净后获得消毒的红豆杉外植体；

（2）、愈伤组织诱导培养

将步骤（1）所得的消毒的红豆杉外植体接种于诱导培养基上，控制温度为20-22℃条件下暗培养，20天后得到诱导培养后的愈伤组织；

所述的诱导培养基，按每升计算，

由400mg NH₄N0₃、556mg Ca(NO₃)₂.4H₂O、990 mg K₂SO₄、96 mg CaCl₂.2H₂O、170 mg KH₂PO₄、0.25 mg Na₂MoO₄.2H₂O、370 mg MgSO₄.7H₂O、22.4mg MnSO₄.H₂O、8.6mg ZnSO₄.7H₂O、0.25mg CuSO₄.5H₂O、27.8 mg FeSO₄.7H₂O、37.3 mg Na₂-EDTA、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、1mg IBA、0.25mg 6-BA、0.5mg CH 、20 g蔗糖、 8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成；

或由400mg NH₄N0₃、556mg Ca(NO₃)₂.4H₂O、990 mg K₂SO₄、96 mg CaCl₂.2H₂O、170 mg KH₂PO₄、0.25 mg Na₂MoO₄.2H₂O、370 mg MgSO₄.7H₂O、22.4mg MnSO₄.H₂O、8.6mg ZnSO₄.7H₂O、0.25mg CuSO₄.5H₂O、27.8 mg FeSO₄.7H₂O、37.3 mg Na₂-EDTA、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2mg  IBA、0.5mg CH 、20 g蔗糖、8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成；

或由1650mg NH₄NO₃、1900mg KNO₃、440mg CaCl₂·2H₂O、370mg MgSO₄·7H₂O、170mg KH₂PO₄、0.83mg KI、6.2 mgH₃BO₃、22.3mg、MnSO₄·4H₂O、8.6mg ZnSO₄·7H₂O、0.25mg Na₂MnO₄·2H₂O、0.025mg CuSO₄·5H₂O、0.025mg CoCl₂·6H₂O、27.8mg FeSO₄·7H₂O、 37.3mg Na₂-EDTA·2H₂O、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2mg IBA 、0.5mg CH 、20 g蔗糖、 8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成； 

（3）、愈伤组织继代培养

将步骤（2）所得的初代愈伤组织接种于继代培养基上，在20-22℃条件下暗培养，20天后得到继代培养后的愈伤组织；

所述的继代培养基，按每升计算，

由400mg NH₄N0₃、556mg Ca(NO₃)₂.4H₂O、990 mg K₂SO₄、96 mg CaCl₂.2H₂O、170 mg KH₂PO₄、0.25 mg Na₂MoO₄.2H₂O、370 mg MgSO₄.7H₂O、22.4mg MnSO₄.H₂O、8.6mg ZnSO₄.7H₂O、0.25mg CuSO₄.5H₂O、27.8 mg FeSO₄.7H₂O、37.3 mg Na₂-EDTA、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2 mg 2,4-D 、1 mg 6-BA 、20 g蔗糖、8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成；

或由400mg NH₄N0₃、556mg Ca(NO₃)₂.4H₂O、990 mg K₂SO₄、96 mg CaCl₂.2H₂O、170 mg KH₂PO₄、0.25 mg Na₂MoO₄.2H₂O、370 mg MgSO₄.7H₂O、22.4mg MnSO₄.H₂O、8.6mg ZnSO₄.7H₂O、0.25mg CuSO₄.5H₂O、27.8 mg FeSO₄.7H₂O、37.3 mg Na₂-EDTA、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2mg 2,4-D 、0.5mg CH 、20 g蔗糖、8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成；

或由1650mg NH₄NO₃、1900mg KNO₃、440mg CaCl₂·2H₂O、370mg MgSO₄·7H₂O、170mg KH₂PO₄、0.83mg KI、6.2 mgH₃BO₃、22.3mg、MnSO₄·4H₂O、8.6mg ZnSO₄·7H₂O、0.25mg Na₂MnO₄·2H₂O、0.025mg CuSO₄·5H₂O、0.025mg CoCl₂·6H₂O、27.8mg FeSO₄·7H₂O、 37.3mg Na₂-EDTA·2H₂O、100 mg肌醇、1.0mg维生素B1、0.5 mg烟酸、0.5 mg维生素B6、2.0 mg甘氨酸、2 mg 2,4-D 、1 mg 6-BA 、20 g蔗糖、8g琼脂、2g活性炭和余量的水组成。