[发明专利]鹿皮胶中所含生物活性成分的特异性鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纯鹿皮胶生物活性成分的鉴定方法，尤其涉及一种鹿皮胶中所含的特异胶原蛋白、特异氨基酸和特异DNA的特异性鉴定方法。

背景技术

中国传统医药中对鹿制品的补虚损、益精血、强腰肾与安心神等功效有大量记载。然后对鹿皮胶的科学数据，特别是对鹿皮胶中的所含的生物活性成分，如胶原蛋白、氨基酸和DNA的特异性鉴定尚无据可查，采用高科技对鹿皮胶的生物活性成分进行测定，有助于生产和鉴别鹿皮胶产品的质量。

发明内容

为了克服上述现有技术中存在的不足，本发明提供了一种鹿皮胶中所含生物活性成分的特异性鉴定方法，该方法为当前市场上鹿皮胶产品的真伪优劣提供了科学可靠的鉴定方式。

本发明为了解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种鹿皮胶中所含生物活性成分的特异性鉴定方法，包括对鹿皮胶中所含特异鹿胶原蛋白的酶联免疫吸附试验；采用茚三酮柱后衍生法对鹿皮胶中所含特异氨基酸组成分析鉴定；和对鹿皮胶中所含鹿皮胶特异DNA序列的PCR扩增实验鉴定。

所述对鹿皮胶中所含特异鹿胶原蛋白的酶联免疫吸附试验，使用特异鹿胶原蛋白的抗体免疫球蛋白作为包被抗体，采用过氧化物酶标记特异鹿胶原蛋白抗体免疫球蛋白。

所述对鹿皮胶中所含特异鹿胶原蛋白的酶联免疫吸附试验，包括以下步骤：

用特异鹿胶原蛋白的抗体免疫球蛋白包被聚丙烯反应板，并在包被完成后洗去所述特异鹿胶原蛋白的抗体免疫球蛋白包被液；将待测样品与包被于聚丙烯反应板上的特异鹿胶原蛋白的抗体免疫球蛋白进行抗原-抗体反应，且在上述抗原-抗体反应结束后洗去所述待测样品；采用过氧化物酶标记所述特异鹿胶原蛋白抗体免疫球蛋白形成过氧化物酶标记的特异鹿胶原蛋白抗体免疫球蛋白；将上述氧化物酶标记的特异鹿胶原蛋白抗体免疫球蛋白添加到上述聚丙烯反应板上，形成特异鹿胶原蛋白抗体免疫球蛋白-特异鹿胶原蛋白-过氧化物酶标记的特异鹿胶原蛋白抗体免疫球蛋白的复合物；采用邻苯二胺底物进行显色；若显色成功则表明待测样品中含有特异鹿胶原蛋白，采用酶标比色仪测定显色物的吸光值定量样品中特异鹿胶原蛋白的含量。

所述对鹿皮胶中所含鹿皮胶特异DNA序列的PCR扩增实验鉴定，包括以下步骤：

按传统DNA纯化提取方法将鹿皮胶中的基因组DNA进行纯化提取，得经纯化的鹿皮胶基因组DNA提取物；利用引物对CAGCTAGCTATAGTCT/GTATGGATAATGCAGTT对所得鹿皮胶基因组DNA提取物进行PCR扩增试验进行扩增，得扩增产物一；利用引物对CGTGGACTACGATGCTT/TAGTCCTTGGCTACGT对所得鹿皮胶基因组DNA提取物进行PCR扩增试验进行扩增，得扩增产物二；将所得扩增产物一和二分别进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据扩增产物片段大小判定鹿皮胶的真伪。

本发明的有益技术效果是：本发明通过对鹿皮胶中所含特异鹿胶原蛋白的酶联免疫吸附实验，根据显色结果来判定鹿皮胶中是否含有所述特异鹿胶原蛋白，以及所含特异鹿胶原蛋白的含量；采用茚三酮柱后衍生法对鹿皮胶中所含特异氨基酸组成进行定性与定量分析鉴定；和对鹿皮胶中所含鹿皮胶特异DNA序列的PCR扩增实验鉴定，若能够扩增出表示鹿特异蛋白成分的条带则表明待测样品为正品；上述方法为当前市场上鹿皮胶产品的真伪优劣，以及鹿皮胶中所含有效生物成分含量提供了科学可靠的鉴定方法。

附图说明

图1为酶联免疫吸附实验中采用酶标比色仪测定特异鹿胶原蛋白时所制定的蛋白浓度标准曲线；

图2为纯鹿皮胶中所含氨基酸（除脯氨酸外）HPLC分析图；

图3为纯鹿皮胶中所含脯氨酸HPLC分析图；

图4为纯鹿皮胶中所含基因组DNA扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果，其中A使用的引物对为DF/DR（即EP-2/H1478），B使用的引物对为SF/SR（即EP-1/H1478）。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。

（一）酶联免疫吸附实验（ELISA）测定鹿皮胶中所含的特异鹿胶原蛋白，其中所采用的待测样品溶解液分别为50mg/ml的鹿皮胶溶液和50mg/ml的鹿皮胶干粉溶液，在96孔聚丙烯反应板中采用两副孔，该方法包括以下步骤：