[发明专利]一种白细胞分类试剂盒及其分类方法

说明书

技术领域

本发明涉及白细胞分类计数试剂盒及其分类方法，具体地讲，本发明涉及在流式细胞分析仪上用于对白细胞亚群进行分类计数的试剂盒及采用所述试剂盒进行白细胞亚群分类计数的方法。 

背景技术

人体外周血中的白细胞可以分为单核细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和嗜碱性粒细胞五个亚类。正常健康人的末梢血中的白细胞的各个亚类的比例是恒定的，当人体出现一些疾病时，就会表现出某一类白细胞数量的增大或减小。例如在急性化脓性感染、粒细胞白血病、剂型出血、术后、重金属中毒等症状下会出现中性粒细胞增多。在变态反应、寄生虫病、某些皮肤病和血液病、术后、烧伤等症状下会出现嗜酸性粒细胞增加。在百日咳、病毒性肝炎、结核、传染性单核细胞增多、慢性淋巴细胞白血病等症状下会出现淋巴细胞的增加。而出现伤寒、副伤寒、疟疾、流感、X线照射、化疗、再障等症状时则会出现中性粒细胞的减少。在伤寒、副伤寒、肾上腺激素治疗后则会出现嗜酸性粒细胞减少。因此在临床检验领域，用患者血液对白细胞进行分类计数，测定不同类型的正常和异常白细胞亚群能获得疾病的多方面信息，以此对某些病症进行筛查判断是非常重要的。 

与传统的手工血液涂片检测方法相比，采用流式技术的自动细胞分析仪具有检测速度快，准确性好等优点。流式技术是将经过试剂处理的血液细胞在流体力学的作用下逐一通过流动室，在激光的照射下形成多种信号，如散射光信号、荧光信号、光吸收信号等，通过这些信号将不同类型的白细胞的差异表现出来，以此将白细胞分成5类。除了白细胞分类以外，这些信号还可能反映出血液细胞的其他信息，如有核红细胞及网织红细胞等。现在，医院多采用基于细胞荧光染色技术的自动血细胞分析仪对白细胞进行分类计数。细胞荧光染色是指将荧光染料附着在细胞上，激光照射细胞时，荧光物质被激发发光，发光强度被检测，并以发光强度表征附着荧光染料的多少。不同的细胞亚群、不同的成熟阶段，其核酸的含量，核酸的结构，DNA/RNA的比例不同，表现不同的着色性。荧光强度信息再配合前向散射反映的体积信息和侧向散射反映的亚细胞结果信息实现对白细胞的分类。 

美国专利3883247公开了一种白细胞五分类方法，它是通过吖啶橙对白细胞核酸进行染色，通过不同的白细胞亚类红色和绿色荧光量的差异来对白细胞进行分类。该方法采用的吖啶橙可以和核酸形成复合物，使荧光增强。这类染料分子相互之间在能量传递的过程中可能会导致光淬灭，使得染料核酸复合物没有荧光发出，影响检测结果真实性。同时在流式细胞分析仪中，吖啶橙和塑料管路有较强的作用，会增加背景荧光强度。为了清除测试后残留的染料和保证测试结果的准确性，需要仪器进行长时间的管路清洗，这就降低了仪器的分析效率。 

美国专利4882284公开了一种白细胞五分类方法，它是通过采用非溶血的方法利用噁嗪类荧光染料对血细胞中的各种细胞进行染色，然后通过不同细胞的前向散射光、侧向散射光和红色荧光强度来对白细胞进行分类。这些染料的荧光量子效率较低，降低了荧光增强的程度，影响检测结果的准确性，同时由于需要测定红细胞、白细胞和血小板，则一些异常红细胞如大红细胞等会影响白细胞准确计数。 

美国专利6004816公开了一种白细胞五分类方法，它是在溶血剂的作用下通过菁类荧光染料对白细胞内的核酸物质进行标记，然后测定侧向散射光和荧光强度信号分类和计数白细胞亚群，但该类荧光染料容易光漂白，同时具有较低的量子产率，这就增加了每次检测的使用量，提高了检测成本。 

因此需要开发新的白细胞分类试剂盒，该白细胞分类试剂盒具有以下特点：可以准确的对白细胞中单核细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和嗜碱性粒细胞进行区分和计数，同时识别血液中的异常白细胞，试剂盒单次使用量低。 

发明内容

本发明的目的：本发明一种白细胞分类试剂盒及其分类方法是利用多肽类物质作为量子点的稳定剂和与发射光谱在近红外区的Cy5菁染料共价连接分子构成的量子点-菁染料作为染色剂，在细胞溶血剂作用下将血液中的红细胞溶解，然后对白细胞中的核酸物质进行染色，采用流式分析原理测定侧向散射光和荧光信号，对白细胞中的淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞进行准确的亚类识别。 

本发明的技术方案：本发明一方面提供了一种用于白细胞分类计数的试剂盒，所述试剂盒包括： 

(1)由多肽类物质作为量子点的稳定剂和与发射光谱在近红外区的Cy5菁染料共价连接形成的水溶性量子点-菁染料探针，其中所述多肽类物质为三肽类分子，优选为谷胱甘肽， 更优选为还原型谷胱甘肽。