[发明专利]一种仿生物特异性免疫吸附材料及其制备方法与应用有效
申请号: | 201210152393.9 | 申请日: | 2012-05-16 |
公开(公告)号: | CN102671638A | 公开(公告)日: | 2012-09-19 |
发明(设计)人: | 李光吉;胡小艳 | 申请(专利权)人: | 华南理工大学 |
主分类号: | B01J20/26 | 分类号: | B01J20/26;B01J20/30;C07K1/22 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人: | 徐嵩 |
地址: | 510640 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 生物 特异性 免疫 吸附 材料 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种仿生物特异性免疫吸附材料,其特征在于具有如下的化学结构:
其中,Sep代表琼脂糖凝胶。
2.权利要求1所述的仿生物特异性免疫吸附材料的制备方法,其特征在于包括如下步骤和工艺条件:
(a)叠氮化琼脂糖凝胶的制备
向环氧化琼脂糖中加入叠氮化钠的水溶液,每克环氧化琼脂糖中加入叠氮化钠3~15mmol,20~60°C反应6~60h后,洗涤抽干得产物;
(b)炔酸的合成
将丁二酸酐溶于二氯甲烷后和炔丙醇于-10~10°C下混合,丁二酸酐与炔丙醇的摩尔比为1~3∶1;然后加入催化剂4-二甲氨基吡啶及缚酸剂三乙胺或吡啶,催化剂、缚酸剂与炔丙醇的摩尔比为0.01~0.1∶0.1~1.0∶1,保温反应0.5~3h后回流12~72h,洗涤干燥得炔酸;
(c)制备炔酸的活性酯
将所述炔酸和N-羟基丁二酰亚胺溶于1,4-二氧六环后,加入缩合剂N,N′-二环己基碳二亚胺并于-10~10°C下保温反应0.5~3h后,升温至20~60°C反应12~72h,过滤、旋蒸,并进行柱层析纯化得炔酸的活性酯;其中N-羟基丁二酰亚胺、N,N′-二环己基碳二亚胺与炔酸的摩尔比为1~3∶1~3∶1;
(d)炔化氨基酸的合成
将炔酸的活性酯溶于1,4-二氧六环后与配基的水溶液混合;用碳酸钠溶液或三乙胺调pH至9.0~12.0,然后于20~80°C反应12~72h;反应完毕以盐酸或饱和柠檬酸水溶液调混合液的pH至2.0~5.0,再用乙酸乙酯及水萃取后进行柱层析纯化得产物;其中氨基酸与炔酸的活性酯的摩尔比为1~3∶1;所述配基为L-组氨酸、苯丙氨酸或色氨酸;
(e)点击反应制备免疫吸附材料
将炔化氨基酸的溶液加入叠氮化琼脂糖中,每克叠氮化琼脂糖加入3~10mmol炔化氨基酸,然后依次加入五水硫酸铜和抗坏血酸钠作催化剂,五水硫酸铜、抗坏血酸钠与炔化氨基酸的摩尔比为0.01~0.05∶0.02~0.1∶1;混合物于20~80°C反应12~72h后,洗涤抽干得产物。
3.根据权利要求2所述的仿生物特异性免疫吸附材料的制备方法,其特征在于:所述环氧化琼脂糖通过如下方法制备:按每克琼脂糖凝胶加入2mL环氧氯丙烷和1~2mL氢氧化钠溶液的比例,将琼脂糖凝胶、环氧氯丙烷和氢氧化钠溶液混合后室温下搅拌反应3~4h,以水洗涤,抽干直到在洗涤液中加入1.3M硫代硫酸钠后酚酞不变红为止,即得环氧化琼脂糖;所述氢氧化钠溶液的浓度为1.5~3M。
4.根据权利要求2所述的仿生物特异性免疫吸附材料的制备方法,其特征在于:所述丁二酸酐溶于二氯甲烷中,每1mmol丁二酸酐中二氯甲烷加入量为0.5~2.5mL。
5.根据权利要求2所述的仿生物特异性免疫吸附材料的制备方法,其特征在于:所述炔酸和N-羟基丁二酰亚胺溶于1,4-二氧六环中,每1mmol炔酸中1,4-二氧六环的加入量为0.2~1.0mL。
6.根据权利要求2所述的仿生物特异性免疫吸附材料的制备方法,其特征在于:所述炔酸的活性酯溶于1,4-二氧六环中,每1mmol炔酸的活性酯中1,4-二氧六环的加入量为0.5~2.5mL。
7.根据权利要求2所述的仿生物特异性免疫吸附材料的制备方法,其特征在于:所述炔化氨基酸溶于DMF或1,4-二氧六环中,每1mmol炔化氨基酸中DMF或1,4-二氧六环的加入量为1.0~3.0mL。
8.权利要求1所述的仿生物特异性免疫吸附材料在IgG分离中的应用。
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