[发明专利]肠道病毒71型胶体金检测试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种肠道病毒71型胶体金检测试纸条，其特征在于，包含有：

1）包被肠道病毒71型VP1特异性抗原SP55的单克隆抗体和质控抗鼠IgG两个条带的硝酸纤维素膜；

2）含有胶体金标记肠道病毒71型VP1特异性抗原SP70的单克隆抗体的玻璃纤维膜。

2.一种制备权利要求1所述肠道病毒71型胶体金检测试纸条的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）两种EV71单克隆抗体的制备：用人工合成SP55和SP70两段VP1的多肽，分别免疫BALB/c小鼠，采用常规杂交瘤细胞技术制备两株杂交瘤细胞，分别进行细胞培养后收集培养液，层析纯化后浓缩并冻干，-20℃保存备用，一株用于胶体金标记蛋白的制备，另一株用于包被硝酸纤维膜；

2）抗体-胶体金结合垫的制备：采用常规柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金颗粒，确定单克隆抗体胶体标记的最佳结合pH 为8.5，胶体金和抗体的配比为：4.5ug/ml胶体金，待标记蛋白最佳缓冲液选择0.005M 、pH8.2～8.5 的硼酸盐缓冲液，标记胶体金经稳定剂处理后，按每平方厘米100-150ul的量取胶体金-抗体结合物溶液，均匀吸附于玻璃纤维上，放入37℃恒温干燥箱，6h后烘干取出后于室温干燥保存；

3）半成品膜条的制备：将VP1的另一株单克隆抗体用0.005M的硼酸盐缓冲液稀释成200μg/ml，将抗鼠IgG用0.005M的硼酸盐缓冲液稀释成1.2mg/ml，将两者喷于硝酸纤维素膜上，分别形成检测线和质控线，两线之间间隔为0.6-1.0cm，干燥后于室温干燥保存；

4）检测试纸条组装：将上述制备好的抗体-胶体金结合垫、半成品膜条、样品垫、吸水垫和反应支持物PVC板组装成检测试纸条。

3.根据权利要求1所述肠道病毒71型胶体金检测试纸条在检测肠道病毒71型中的应用。