[发明专利]一种牛乳铁蛋白肽毕赤酵母工程菌的制备方法

权利要求书

1.一种牛乳铁蛋白肽毕赤酵母工程菌，其特征是一种抗菌肽基因Lfcin B转化GS115、KM71和X33等毕赤酵母菌株而制得的工程菌。

2.根据权利要求1所述的牛乳铁蛋白肽毕赤酵母工程菌，其特征在于所述的载体是pPIC3.5K、pPIC9K、pPICZαA、pGAPZαA等毕赤酵母表达载体。

3.根据权利要求1所述的牛乳铁蛋白肽毕赤酵母工程菌，其特征在于所述的基因是抗菌肽基因Lfcin B，其核苷酸序列如下：TTT AAG TGT AGA AGA TGG CAA TGG  AGA  ATG  AAG AAG TTG GGT GCT CCA TCT ATT ACT TGT GTT AGAAGA GCT TTC。

4.根据权利要求2所述的抗菌肽基因，其特征在于，经酵母偏爱密码子优化的DNA序列为：TTT AAG TGT AGA AGA TGG CAA TGG AGA ATG AAG AAG TTG GGT GCT CCA TCT  ATT  ACT TGT GTT  AGA  AGA GCT TTC。

5.根据权利要求2所述基因编码蛋白LFB，其特征在于，其氨基酸序列为：FKCRRWQWRMKKLGAPSITCVRRAF。

6.根据权利要求1所述的抗菌肽LFB制品，其特征在于，制备方法包括如下步骤：

(1)将抗菌肽基因Lfcin B经酵母偏爱密码子优化后设计引物合成基因序列；

(2)将抗菌肽基因Lfcin B克隆到表达载体pPIC3.5K，得到重组表达载体pPIC3.5K-LfcinB；

(3)将重组表达载体pPIC3.5K-LfcinB电击转化毕赤酵母GS115；

(4)在pH6.0的培养基，以浓度为1％的甲醇，对上述重组酵母基因工程菌诱导表达5天； 

(5)放料，发酵液经80℃以上高温处理后，喷雾干燥得到转抗菌肽LFB的制品。

7.根据权利要求1所述的抗菌肽LFB制品，其特征在于所叙述的抗菌肽在养殖中的应用。

8.根据权利要求1所述的抗菌肽LFB制品，其特征在于，所述及的应用是在制备饲料添加剂，促进家禽家畜的生长。