[发明专利]新的安丝菌素类化合物及其制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种化合物，尤其涉及一种新的安丝菌素类化合物，本发明还涉及该安丝菌素类化合物的制备方法。

【背景技术】

1972年Kupchan等从原产热带非洲的齿叶美登木(M.serrata)中首次分离出天然抗肿瘤活性成分——大环内酯类化合物美登素(Maytansine)，其后研究人员相继从高等植物矛卫科、鼠李科、大戟科植物、苔藓类植物中分离到美登木类化合物。最引人注意的是从微生物中发现了这类化合物，1977年，Higashide及其同事在筛选抗癌活性成分的过程中，从分离自莎草科苔属植物叶子的橙色束丝放线菌(Actinosynnema pretiosum)中得到六个美登素衍生物，命名为安丝菌素P0、P1、P2、P3、P4、P4’。随后又从另一个橙色束丝放线菌亚种(A pretiosum ssp.Auranticum)中分离得到除上述六个化合物外的十五个新安丝菌素，其母核为19-C的大环内酰胺环，C-3连接不同长度的碳链，主要活性成分是P-3。

上述所有这些安丝菌素均可以被还原分解成C-3美登木醇(P-0)，该醇是用于合成含硫醇美登木素生物碱的前体。安丝菌素已被化学转变成含硫醇的美登木素生物碱(maytansinoids)，该生物碱以细胞结合剂-美登木素生物碱偶联物的形式体现出的医疗用途已被报道。

随着对美登素类抗体结合物研究的不断深入，市场对美登木素类化合物的需求量逐步扩大。由于美登木类植物含美登素及其同系物的含量很低，大量砍伐美登木类植物会对生态造成严重破坏，且从野生植物中寻找原料难以满足工业生产的需要；采用化学合成，又因美登木素结构复杂存在全合成和半合成工艺复杂、过程繁琐、产率很低、反应专一性差等缺点。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题之一在于提供一种新的安丝菌素类化合物，所述新的安丝菌素类化合物具有抗肿瘤活性。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题之一的：式(I)代表的新的安丝菌素类化合物，

其中，R为CH₂CH₃或CH₂CH(CH₃)₂。

本发明所要解决的技术问题之二在于提供一种新的安丝菌素类化合物的制备方法，通过微生物发酵方法制备安丝菌素类化合物具有工艺简单、生产成本低的优点。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题之二的：一种所述的新的安丝菌素类化合物的制备方法，其操作步骤如下：

步骤一：制备束丝放线菌菌株FIM06-0063(Actinosynnema sp)发酵液；所述束丝放线菌菌株FIM06-0063，于2011年12月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.5677。

步骤二：将步骤一所获得的束丝放线菌菌株FIM06-0063发酵液进行大孔树脂吸附柱层析，得到粗提物；

步骤三：将步骤二所获得的粗提物进行正相硅胶柱层析，并采用氯仿-甲醇梯度洗脱粗提物，然后分段收集各洗脱液；

步骤四：将步骤三所获得的各洗脱液分别进行薄层层析，并采用高效液相色谱对各洗脱液分别进行检测分析，然后将薄层层析结果显橙红色、且高效液相色谱检测结果具有相同峰的洗脱液合并，并减压浓缩该合并后的洗脱液得到第一浓缩物；

步骤五：将步骤四所获得的第一浓缩物进行中压反相硅胶柱层析以获得粗产物，进行中压反相硅胶柱层析时，先采用体积分数为10％甲醇水溶液为流动相平衡10分钟后，然后流动相采用体积比10％～100％∶1的甲醇-水溶剂系统梯度洗脱90min，流动相的流速为5ml/min；

步骤六：将步骤五所获得的粗产物进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，所述Sephadex LH-20凝胶柱层析采用体积比1∶1的氯仿-甲醇溶剂系统洗脱，并根据流分与碘化铋钾显色反应分段收集各流分，然后将与碘化铋钾反应显色相同的流分合并，减压浓缩以获得第二浓缩物；

步骤七：将步骤六所获得的第二浓缩物采用制备型高效液相色谱进行分离，得到3个组分；最后，将3个组分分别经过制备型硅胶板分离以获得安丝菌素类化合物；所述制备型高效液相色谱的分离条件为：流动相为70％的甲醇水溶液，流动相的流速为1.5ml/min，检测波长为254nm。

进一步地，所述束丝放线菌菌株FIM06-0063的分离方法如下：