[发明专利]C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1类似物及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，涉及一种新型的C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1类似物；本发明同时涉及一种该内吗啡肽-1类似物的制备方法及其在制备镇痛药物中的应用。

背景技术

在1997年，美国都兰大学神经生物学家Zadina和他的同事们通过免疫组化筛选肽库的办法，从牛脑中分离并且提纯得到了对于μ阿片受体有着很高选择性与亲和性的配体（见Zadina, J.E.; Hackler ,L.; Ge, L.J.; Kastin ,A.J. A potent and selective endogenous agonist for the μ-opiate receptor. Nature .1997, 386: 499-502）。该配体被称作是内源性阿片肽，其结构目前发现的有两种，它们分别为：内吗啡肽-1(Tyr-Pro-Trp-Phe-NH₂)和内吗啡肽-2（Tyr-Pro-Phe-Phe-NH₂）。然而有研究表明，内吗啡肽-2有着天然的弱的治疗学特性，其镇痛效能要比内吗啡肽-1的低，并且副作用也比内吗啡肽-1的大。Peter等人也发现，在离体酶解稳定性方面，内吗啡肽-2的稳定性没有内吗啡肽-1的好（见Peter A,Toth G,Tomboly C,Laus G,Tourwe D.Liquid chromatographic study of the enzymatic degradation of endomorphins,with identification by electeospray ionization mass spectrometry,J Chromatogr.1999,846:39-48）。

在治疗疼痛中，与吗啡镇痛能力相当的阿片类镇痛药物起着至关重要的作用，特别是对于重度疼痛中的治疗始终处于不能替代的地位。最重要的是，内吗啡肽还对神经疼痛有显著的治疗效果；同时内吗啡肽在有效的镇痛药物浓度下其副作用会更小。但是，这些阿片类的药物不能进入到临床上使用，因为阿片类药物对有疼痛的病人会产生非常多的副作用，这些副作用包括以下几个方面：便秘，成瘾，耐受，呕吐，和呼吸抑制等。还有几个内吗啡肽不能成为临床药物的原因是，内吗啡肽镇痛时间比较短，酶解稳定性比较差，通过BBB的能力很弱以及口服无药效等等。因此，通过对内吗啡肽-1进行结构改造，在尽量不降低或提高其亲和活力的前提下，提高酶解稳定性和血脑屏障通透能力，从而得到外周给药产生高效镇痛活性的内吗啡肽-1类似物成为近年研究的方向。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1类似物——四肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH。

本发明的另一目的是提供一种C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1类似物的制备方法；

本还有一个目的，就是提供一种C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1类似物在制备镇痛药物中的应用。

（一）内吗啡肽-1类似物

本发明C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1类似物（命名为[GAGPNH₂]-EM-1），是在内吗啡肽-1的N端用胍基化修饰，在内吗啡肽-1的2、3位Pro-Typ被D-Ala-Gly替换，4位Phe苯环对位用氨基化修饰。其具体结构式如下：

因为脑毛细血管内壁带有负电荷，因此使肽类物质带上正电荷可提高其BBB通透性。本发明将内吗啡肽-1的N端胍基化，加强了内吗啡肽-1的阳离子化的程度；将4位苯丙氨酸对位氨基化，同时引入D-型氨基酸，使内吗啡肽-1中3位的氨基酸构象反转，破坏了内吗啡肽-1的活性构象，活性会降低；同时将内吗啡肽-1的3位氨基酸换成Gly，这样可以确保β转角的活性构象，得到活性高于内吗啡肽-1的类似物——C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1的类似物（四肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH）。

（二）内吗啡肽-1类似物的制备

本发明C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1类似物的制备方法，包括以下工艺步骤：

（1）Boc-Phe(4-NO₂)-NH₂的合成