[发明专利]C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1类似物及其制备和应用

权利要求书

1.一种C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽-1类似物，其结构式如下：

。

2.如权利要求1所述C端苯丙氨酸对位氨基化修饰的内吗啡肽类似物的制备方法，包括以下工艺步骤：

（1）Boc-Phe(4-NO₂)-NH₂的合成

将叔丁氧羰基保护的对硝基苯丙氨酸充分溶解于四氢呋喃中，加入叔丁氧羰基保护的对硝基苯丙氨酸摩尔量1.0~1.5倍的1-羟基苯并三唑，搅拌使其完全溶解，待溶液的颜色变成红褐色后，再加入叔丁氧羰基保护的对硝基苯丙氨酸摩尔量1~4倍量的N,N-二异丙基乙胺，搅拌反应12~36小时，旋蒸除去四氢呋喃后溶解于水中，乙酸乙酯萃取，有机相依次用柠檬酸、饱和的碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的白色固体，即为Boc-Phe(4-NO₂)-NH₂； 

（2）单苄氧羰基化的脒基吡唑盐酸盐的合成 

将脒基吡唑盐酸盐完全溶解于二氯甲烷中，加入脒基吡唑盐酸盐摩尔量2~6倍量的苄氧羰基氯，搅拌反应10~30分钟，再加入脒基吡唑盐酸盐摩尔量3~8倍量的三乙胺，于0~5℃下搅拌反应1~3小时，升温至室温，搅拌10~20小时，旋蒸除去二氯甲烷，用乙酸乙酯萃取，用饱和的氯化钠溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，重结晶，得到的白色固体即为单苄氧羰基化的脒基吡唑盐酸盐；

（3）双苄氧羰基化的脒基吡唑盐酸盐的合成

在惰性气体保护下，于0~5℃下，将氢化钠充分溶解于四氢呋喃中，依次加入单苄氧羰基化的脒基吡唑盐酸盐、苄氧羰酰琥珀酰亚胺，搅拌反应30~48小时，用冰水猝灭，旋蒸除去四氢呋喃后，用乙酸乙酯萃取，依次用柠檬酸、饱和的碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到油状混合物，油状混合物经纯化，得到双苄氧羰基化的脒基吡唑盐酸盐晶体；

（4）苄氧羰基化的酪氨酸羧基端的活化

于0~5℃下，将苄氧羰基保护的酪氨酸溶解于四氢呋喃中，加入苄氧羰基保护的酪氨酸摩尔量1~3倍的N-羟基琥珀酰亚胺和苄氧羰基保护的酪氨酸摩尔量1~3倍的N,N'-二环己基碳二亚胺，搅拌使其充分溶解，继续搅拌反应10~20分钟，升温至室温，反应12~18小时，抽滤，除去生成的二环己基脲，得到活化滤液；

（5）接肽反应

将Cbz保护的酪氨酸摩尔量1~4倍的丙氨酸溶于饱和碳酸氢钠溶液中，再将上述得到的活化滤液加入其中，于0~5℃下搅拌反应20~60分钟，升温至室温，反应12~18小时；旋蒸除去四氢呋喃，用乙酸乙酯萃取，除去有机相，保留水相；于0~5℃下调pH=2~6，然后用乙酸乙酯萃取，有机相依次用质量浓度5~10%的柠檬酸水溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到淡黄色的油状液体；柱层析分离，得到无色的油状物，即为氮端的二肽化合物；

（6）H-Tyr-D-Ala-OH的而成

将氮端的二肽化合物溶于无水甲醇中，加入活性钯碳，室温搅拌下，通氢气反应0.5~2h；真空抽滤除去活性钯碳，减压浓缩，得无色油状物即为二肽化合物H-Tyr-D-Ala-OH；

（7）Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH的合成

将步骤（3）合成的双苄氧羰基化的脒基吡唑盐酸盐，步骤（6）合成的H-Tyr-D-Ala-OH以1:1~1:3的摩尔比加入到N-N-二甲基甲酰胺中，再加入双苄氧羰基化的脒基吡唑盐酸盐摩尔量4~8倍的三乙胺，于0~5℃下搅拌反应25~35分钟，升温至室温，反应48~96小时；用乙酸乙酯萃取，有机相依次用5~10%的柠檬酸水溶液、饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到淡黄色油状液体；柱层析分离，得到无色油状物，即为Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH；

（8）Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH的合成

于0~5℃下，将Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH溶解于四氢呋喃中，加入Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH摩尔量1~3倍的N,N'-二环己基碳二亚胺，搅拌使其充分溶解，继续搅拌反应10~20分钟，升温至室温，反应12~18小时，抽滤，除去生成的二环己基脲，得到活化滤液；

将Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-OH摩尔量1~4倍的甘氨酸溶于饱和碳酸氢钠溶液中，再将上述活化滤液加入其中，于0~5℃下搅拌反应20~60分钟，升温至室温，反应12~18小时；旋蒸除去四氢呋喃，用乙酸乙酯萃取，除去有机相，保留水相；于0~5℃下调pH=2~6，然后用乙酸乙酯萃取，有机相依次用质量浓度5~10%的柠檬酸水溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到淡黄色的油状液体；柱层析分离，得到无色的油状物，即为氮端的三肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH；

（9）脱Boc-Phe（4-NO₂）-NH₂氨基酸的叔丁氧羰基

于0~5℃下,将步骤（1）合成的氨基酸Boc-Phe（4-NO₂）-NH₂溶于二氯甲烷，之后加入氨基酸Boc-Phe（4-NO₂）-NH₂摩尔量2~6倍量的三氟乙酸，搅拌反应0.5~2小时，浓缩，得到白色的固体，用乙醚结晶，得到白色固体，即为氨基酸H-Phe（4-NO₂）-NH₂；

（10）Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH₂的合成

于0~5℃下，将Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH溶解于四氢呋喃中，加入Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH摩尔量1~3倍的N,N'-二环己基碳二亚胺，搅拌使其充分溶解，继续搅拌反应10~20分钟，升温至室温，反应12~18小时，抽滤，除去生成的二环己基脲，得到活化滤液；

将Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-OH摩尔量1~4倍的氨基酸H-Phe（4-NO₂）-NH₂溶于饱和碳酸氢钠溶液中，再将上述活化滤液加入其中，于0~5℃下搅拌反应20~60分钟，升温至室温，反应12~18小时；旋蒸除去四氢呋喃，用乙酸乙酯萃取，然后用乙酸乙酯萃取，有机相依次用质量浓度5~10%的柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到淡黄色的油状液体；柱层析分离，得到白色固体，即为四肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH₂；

（11）GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NH₂)-NH₂的合成

将四肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH₂溶于无水甲醇中，加入活性钯碳，室温搅拌下，通氢气反应0.5~2h；真空抽滤除去活性钯碳，减压浓缩，得白色护体即为四肽化合物Cbz₂-GU-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(4-NO₂)-NH。