[发明专利]尿肌氨酸及肌酐测定试剂盒

权利要求书

1.一种尿肌氨酸和肌酐测定试剂盒，其特征在于组成包括： 

1）对照品：肌氨酸浓度分别为100-300μg/L、1000-3000μg /L、5000-8000μg /L和肌酐浓度分别为100-300mg/L、1000-3000mg/L、5000-8000mg/L的化学品；

2）质控品：肌氨酸浓度为800-1000μg /L 和肌酐浓度为800-1000mg/L的化学品；

3）内标溶液：肌氨酸-d3 50-100mg/L，肌酐-d3 150-200 mg/L的化学品；

4）沉淀剂：乙腈；

5）流动相A：含0.1 mmol/L甲酸铵和0.4%甲酸的20%乙腈水溶液；

6）流动相B：含0.02%甲酸的20%乙腈水溶液。

2.权利要求1所述试剂盒用于尿中肌氨酸和肌酐测定的方法，其特征在于步骤为：

1）标准曲线的绘制:用对照品和內标的比值绘制标准曲线，用质控品和內标的比值确认标准曲线；

2）尿样采集：随机尿，3000rpm离心5min，取上清尿2mL左右-20℃保存，临用前于室温下解冻；

3）样品稀释处理：尿样中以乙腈∶尿样体积比为2∶1的比例加入沉淀剂乙腈，除去尿样中蛋白，并稀释尿样至肌氨酸浓度为100-5000μg/L，肌酐浓度为100-5000mg/L；

4）色谱分离纯化：以硅胶键合相填料为色谱柱，用流动相A和／或流动相B等度或者梯度洗脱，使肌氨酸和肌酐与其他干扰物质色谱分离；

5）质谱检测：经液相色谱仪分离后的肌氨酸和肌酐，采用电喷雾离子化串联质谱仪，在正离子检测模式下，检测肌氨酸和肌酐；肌氨酸的母离子，其质量电荷比m/z为90±0.5；经过进一步质谱碎裂后同时检测肌氨酸的母离子和碎片离子，其质量电荷比m/z分别为90±0.5和44±0.5；肌酐的母离子，其质量电荷比m/z为114±0.5；经过进一步质谱碎裂后同时检测肌酐的母离子和碎片离子，其质量电荷比m/z分别为114±0.5和86±0.5；

6）结果计算：以肌氨酸和肌酐质谱检测获得的峰面积与內标峰面积的比值，计算肌氨酸或肌酐的浓度值。

3.根据权利要求2所述测定方法，其特征在于步骤4）所述肌氨酸与其他干扰物质色谱分离的条件是：色谱柱： HYPERSIL silica，5μm， 2.1×100mm，Thermo，流动相B：含0.02%甲酸的 20%乙腈溶液，流速：0.3mL/min，进样量：5μL。

4.根据权利要求2所述测定方法，其特征在于步骤4）所述肌酐与其他干扰物质色谱分离的条件是：色谱柱：HYPERSIL silica，5μm， 2.1×100mm，Thermo ，流动相A ：含 0.1 mmol/L甲酸铵和 0.4%甲酸的 20%乙腈溶液，流动相B：含 0.02%甲酸的 20%乙腈溶液，梯度洗脱，0～0.1 min、0.1～2 min、 2.1～6 min，流动相A∶流动相B体积百分比分别为25％∶75％、100％∶0％、25％∶75％，流速：0.3mL/min，进样量：3μL。

5.根据权利要求2所述测定方法，其特征在于步骤5）所述肌氨酸质谱检测条件为：电喷雾离子源， 正离子扫描；MRM扫描，肌氨酸检测通道90.1>44.1，±0.5 m/z，肌氨酸-d3检测通道93.1>47.1 ，±0.5 m/z，离子化电压：5000V；离子化温度：550℃；喷雾气：60 psi；加热气：60 psi；气帘气：25 psi；碰撞气：中等；去簇电压（DP）：21 V；入口电压（EP）：4 V；碰撞能（CE）：20 V；出口电压（CXP）：6 V。

6.根据权利要求2所述测定方法，其特征在于所述步骤5）肌酐质谱检测条件为：电喷雾离子源，正离子扫描；MRM扫描，肌酐检测通道114.8>86.1，±0.5 m/z，肌酐-d3检测通道117.1>89.1  ±0.5 m/z  ，离子化电压：5000V；离子化温度：550℃；喷雾气：60 psi；加热气：60 psi；气帘气：25 psi；碰撞气：中等；去簇电压（DP）：26 V；入口电压（EP）：7 V；碰撞能（CE）：18 V；出口电压（CXP）：5 V。