[发明专利]一株抑制生物胺产生的棒状乳杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株棒状乳杆菌，特别是一株非生物胺产生乳酸杆菌。 

背景技术

生物胺（Biogenic amines，BA）是生物体内产生的一类低分子量含氮有机化合物的总称。它们是生物体合成荷尔蒙、核苷酸、蛋白质的前体，因此生物体自身合成的适量生物胺具有促进生长、增强代谢活力，加强肠道免疫系统、控制血压等生理功能。但是过量外源生物胺的摄入会导致生物体的不良反应，如高血压、头疼，腹部痉挛、腹泻和呕吐等。 

乳酸杆菌是是一群存在于食物和宿主体内能发酵糖类产生乳酸的细菌，被广泛应用于多种产品的发酵生产中，如乳制品、发酵香肠、鱼露、酒精饮料等。在生产过程中，原料中的天然氨基酸或者原料中的蛋白类物质可以经由酶解产生的氨基酸在微生物的氨基酸脱羧酶作用下脱羧，生成相应的生物胺。具有氨基酸脱羧酶活性的微生物包括乳酸菌以及其它生产菌与外源菌株。因此，筛选不产生物胺的乳酸杆菌对于以乳酸杆菌为主要生产菌的食品的安全生产和消费者的健康有着重要的意义。 

乳酸杆菌的抑菌作用主要是通过两个方面实现的。一方面，由乳酸杆菌产生的乳酸，可以抑制某些细菌的生长。另一方面，多数乳酸杆菌会产生细菌素或类细菌素，起到抑制其它细菌生长的作用。乳酸杆菌合成的细菌素主要作用于革兰氏阳性菌及与其亲缘性较近的菌株，对于革兰氏阴性菌和真菌有抑菌效果的报道较少。而在食品发酵生产过程中比较容易污染外界微生物，其中包括如大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌。这些细菌不仅会导致发酵失败，还可能危害食用人群的健康。因此，筛选可以抑制这些革兰氏阴性菌生长的乳酸杆菌可保证发酵食品的品质和安全。 

发明内容

本发明提供了一株抑制生物胺产生的棒状乳杆菌（Lactobacillus coryniformis）BBE-H3，已于2012年4月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2012130。 

所述棒状乳杆菌分离自家庭自制泡菜，其保藏条件如下：从生长良好的平板上挑取单菌落转接入MRS培养基中，在37℃静置培养（5%CO₂）24h，取500μL培养液移入含有500μL40%甘油的保藏管中，置于-80℃冰箱保存。 

所述MRS培养基为培养乳酸杆菌专用，购于OXIOD公司。 

生物胺检测培养基：酵母膏0.5%，牛肉膏0.5%，胰蛋白胨0.5%，NaCl 0.25%，葡萄糖 0.05%，Tween-800.1%，MgSO₄·7H₂O 0.02%，MnSO₄·H₂O 0.005%，FeSO₄0.04%，柠檬酸三胺0.2%，CaCO₃0.01%，吡哆醛-5-磷酸0.005%，K₂HPO₄0.2%，pH 5.3，溴甲酚紫0.006%，氨基酸1%。 

所述棒状乳杆菌的培养条件为：将保藏的乳酸菌在MRS固体培养基上划线，于37℃静置（5%CO₂）培养48h，挑取单菌落接入MRS液体培养基，37℃静置培养24h，离心15min（8000rpm，4℃）后去上清，用磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.0）悬浮菌体。 

向96孔板中加入200μL含不同氨基酸（色氨酸、组氨酸、酪氨酸、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸）的生物胺检测培养基，分别单独接种10μL乳酸菌。再将棒状乳杆菌发酵液与生物胺检测培养基按1:9、1:19的比例混合加入空白的孔中，接种10μL沙克乳杆菌。37℃静置（5%CO₂）培养48h后，观测到沙克乳杆菌产精胺，而加入少量棒状乳杆菌后沙克乳杆菌不产生物胺。因此，在棒状乳杆菌的发酵液的影响下沙克乳杆菌不产生物胺。 

本发明还提供了应用棒状乳杆菌抑制产生物胺微生物生长的应用。 

为解决上述技术问题，将平板上活化好的棒状乳杆菌接种于MRS液体培养基中，37℃静置（5%CO₂）培养24h，离心15min（8000rpm，4℃）后取上清，经0.22μm滤膜过滤除菌后置于4℃冰箱保存。 

用于抑菌检测的指示菌及其培养条件： 

大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌：LB培养基，37℃摇瓶培养； 

产碱假单胞菌、荧光假单胞菌、石油假单胞菌：LB培养基，30℃摇瓶培养； 

鼠伤寒沙门氏菌：BHI(Brain Heart Infusion，脑心浸液培养基)，37℃摇瓶培养；