[发明专利]一种提高苯系物细胞传感器检测效果的固定化方法

权利要求书

1.一种利用海藻酸钙固定化处理提高苯系物细胞传感器荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)A506(pTS)检测效果的方法，其特征在于，通过固定化处理，提高了细胞传感

器单位体积荧光信号和单个细胞荧光信号强度；具体步骤如下：

(1)细胞传感器准备：细胞传感器接种于已灭菌的LB培养基中，并在摇床中以30℃、200rpm的条件过夜生长，直到细胞进入指数生长末期(OD600＝2.400)；

(2)细胞传感器洗涤：取生长好的菌液20mL在4℃下离心，转速4000r/min，离心10min。去掉上清液后用用灭菌的磷酸缓冲液((NH)₂HPO₄3.0g/L，KH₂PO41.2g/L，NaCl5.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.2g/L)洗涤、重悬；重复重悬、离心2次后，菌体用5mL磷酸缓冲液重悬；

(3)细胞传感器固定化：在5mL菌液中加入等体积已灭菌的海藻酸钠(4％)溶液；充分混合后，在距离CaCl₂(2％)溶液液面10crm以上的位置，通过针头逐滴加入CaCl₂溶液中并形成球状颗粒；使用磁力搅拌器对CaCl₂溶液进行低速搅拌2h，之后含有细胞传感器的固定化颗粒用已灭菌的生理盐水洗涤，并保存于冰箱4℃中待用；

(4)信号检测：将50个含有细胞传感器的固定化颗粒加入到50mL含有苯系物染污的培养基中，在以30℃、200rpm的条件下运行；之后取4个固定化颗粒置于96孔板中，通过全波长扫描式多功能酶标仪对荧光信号进行扫描，完成检测。