[发明专利]EPO变体与Fc融合蛋白

说明书

技术领域

本发明涉及一种融合蛋白，具体地说，涉及一种EPO变体与Fc融合蛋白，属于基因工程技术领域。

背景技术

    促红细胞生成素（EPO)是一种公知的糖蛋白，最初因其对骨髓的激素性影响和参与成熟血红细胞的生长与发育而被鉴定。除这种造血活性之外，最近已发现EPO还在许多组织中作为有效的、局部生成的改善代谢应激的分子而起作用。EPO的组织保护活性通过与促红细胞生成素受体的相互作用而介导。例如，在脑部，EPO和它的受体与局部产生，受到代谢应激物的调控，并提供神经保护和抗炎的功能（Doggrell，SA.(2004)Expert Opin Investig Drugs;13(11):1517-9)。在骨髓中，EPO提供的有益效果包括抑制神经元，少突胶质细胞和内皮细胞的凋亡和坏死，减少空化，降低脂质过氧化，动员内皮祖细胞，促进血管发生和恢复血管的自我调节（Gorio，A.等（2002）Proc Natl Acad Sci USA;99(14):9450-5；Leist M.(2004)Science;305（5681）：239-42）。

     然而对于应用EPO提供神经保护和防止组织损伤等功能来说，造血活性通常并不需要，并且如果施用大量的EPO来治疗或缓解神经细胞损伤时，造血活性是有害的。氨甲酰化的促红细胞生成素（CEPO）也显示出表现出组织保护效应，但是没有红细胞生成效应（Leist 等（2004） Science 305：239-242和WO 2005/025606 A1），但CEPO需要需要使用化学方法对EPO进行氨甲酰化，应用和效果都受到一定的限制。EPO变体重组蛋白， 1998年Qiu H, Belanger A, Yoon HW, Bunn HF等人做了报道，然后由于EPO分子量小，EPO变体重组蛋白体内半衰期非常短，仅为4到11小时，对应病人而言，这就需要在短时间内反复多次接受多次注射。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供一种EPO变体与Fc融合蛋白。

本发明的EPO变体与Fc融合蛋白，所说的EPO变体为与造血功能相关氨基酸定向突变使得造血活性消失的EPO胞外区全序列，所说的Fc片段包括铰链区、CH2区和CH3区，所说的EPO变体与Fc序列之间为直接融合或通过连接序列融合，所说的EPO变体选自人或其他动物的EPO，所说的Fc片段选自人或动物的IgG、IgM、IgD、IgA或者它们的亚型，所说Fc片段选自天然型Fc或与受体和/或补体结合相关的氨基酸改变的突变型Fc。

所说的EPO变体的氨基酸序列如SEQ ID.1 所示，DNA序列如SEQ ID.2 所示。

所说的Fc片段选自人IgG1、小鼠IgG2a或大鼠IgG2a，其中人IgG1的氨基酸序列如SEQ ID.3所示，小鼠IgG2a的氨基酸序列如SEQ ID.4 所示、大鼠IgG2a的氨基酸序列如SEQ ID.5 所示。

所说的突变型Fc片段选自突变型人IgG1或小鼠IgG2a，其中突变型人IgG1的氨基酸序列如SEQ ID.6 所示，突变型小鼠IgG2a的氨基酸序列如SEQ ID.7 所示。

本发明还包括一种EPO变体与Fc融合蛋白编码DNA序列的载体，所说的载体为真核载体。

所说的真核载体为哺乳动物细胞表达载体。由于原核表达体系所表达的产物，缺乏糖基化修饰功能，蛋白功能不能保证，因此在此发明中，优选哺乳动物细胞表达载体，如pRc-CMV( Invitrogen公司)。

本发明还包括一种EPO变体与Fc融合蛋白编码DNA序列的载体的宿主细胞，所说的宿主细胞选自真核细胞或原核细胞。

所说的宿主细胞选自CHO细胞。

本发明的EPO变体与Fc融合蛋白的用途，包括促进神经干细胞再生，制备预防和治疗神经细胞损伤的药物中的应用。