[发明专利]胍基化聚乙烯醇转基因非病毒载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.胍基化聚乙烯醇转基因非病毒载体，其特征在于，以聚乙烯醇为主链，具体结构如下所示：

其中n、m、p分别为三种不同重复单元的数量。

2.一种制备胍基化聚乙烯醇转基因非病毒载体的方法，其特征在于，按照下述步骤进行：首先，即步骤（1），将聚乙烯醇和对甲苯磺酰氯进行反应得到聚乙烯对甲苯磺酸酯；其次，即步骤（2），将聚乙烯对甲苯磺酸酯和过量的乙二胺反应，以得到乙二胺修饰的聚乙烯醇；

然后，即步骤（3），将乙二胺修饰聚乙烯醇和1H-吡唑-1-甲咪盐酸盐放入容器中，加入蒸馏水进行溶解，室温下进行反应，得到胍基化聚乙烯醇非病毒基因载体。

3.根据权利要求2所述的一种制备胍基化聚乙烯醇转基因非病毒载体的方法，其特征在于，所述步骤（1）具体来说，向容器中加入聚乙烯醇和吡啶，85℃下预反应两小时，再向该烧瓶中加入双倍体积的吡啶，反应体系降温至5℃左右；冷却后，再向容器中加入1.5倍体积的对甲苯磺酰氯，溶液变为淡黄色；反应体系在5~10℃下反应24h；结束后，向反应瓶中加入等体积丙酮，使得非均相反应体系中的不溶物充分溶解，将溶液加入约10倍体积的蒸馏水中产生白色沉淀，减压抽滤，弃掉液体；重复这一步骤，将滤得固体再次溶于丙酮并在水中沉淀，减压抽滤得到产物并进行真空干燥，即得到聚乙烯对甲苯磺酸酯。

4.根据权利要求2所述的一种制备胍基化聚乙烯醇转基因非病毒载体的方法，其特征在于，所述步骤（2）具体来说，将得到的聚乙烯对甲苯磺酸酯加入容器中，加入二甲基亚砜使其溶解，并加入过量的乙二胺，在70℃下反应48h；冷却后，加入盐酸调节pH至中性，将反应液在去离子水中透析3天（透析袋截留分子量3500Da），每8h换一次水，冷冻干燥，得到乙二胺修饰的聚乙烯醇。

5.根据权利要求2所述的一种制备胍基化聚乙烯醇转基因非病毒载体的方法，其特征在于，所述步骤（3）具体来说，将乙二胺修饰聚乙烯醇和1H-吡唑-1-甲咪盐酸盐放入容器中，加入蒸馏水进行溶解，20—25度反应24h，再将反应液在去离子水中透析3天（透析袋截留分子量3500Da），每8h换一次水，冷冻干燥，得到胍基化程度不同的胍基化聚乙烯醇非病毒基因载体。

6.根据权利要求2所述的一种制备胍基化聚乙烯醇转基因非病毒载体的方法，其特征在于，在完成步骤（2）后，可对乙二胺修饰的聚乙烯醇进行核磁氢谱测试，通过测试结果确定乙二胺的接枝率，并根据氨基摩尔量加入不同量的1H-吡唑-1-甲咪盐酸盐进行反应，进而得到不同胍基化程度不同的胍基化聚乙烯醇非病毒基因载体。

7.如权利要求1所述的胍基化聚乙烯醇转基因非病毒载体在基因治疗领域的应用。