[发明专利]一种黄牛FBXO32基因单核苷酸多态性及作为分子标记的检测方法

权利要求书

1.一种黄牛FBXO32基因单核苷酸多态性及作为分子标记的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以包含FBXO32基因的待测黄牛全基因组DNA为模板，以引物对P1、P2、P3为引物，PCR扩增黄牛FBXO32基因部分片段，

所述的引物对P1为：

上游引物：5′CAGGTCCCCGTCCATCAGTC 3′

下游引物：5′GGAAGCGTTTCCAGCCATCGGC 3′

所述的引物对P2为：

上游引物：5′GGCCCTGTCTGCCATTTATCT 3′

下游引物：5′TTCCATCCACTCACATTCCCT 3′

所述的引物对P3为：

上游引物：5′CCAAACAGTCACCGCATCTCC 3′

下游引物：5′AGGGCCTGCATCAGTCTTACC 3′

上述引物对在FBXO32基因(NCBI参考序列号：NC_007312.4)中的位置如下：

P1：上游引物：322bp～341bp；下游引物：431bp～452bp；

P2：上游引物：738bp～758bp；下游引物：1049bp～1069bp；

P3：上游引物：53299bp～53319bp；下游引物：53855bp～53875bp；

(2)以限制性内切酶HaeIII、HaeIII、BfaI分别消化PCR扩增产物之后；

(3)对酶切后的扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定黄牛FBXO32基因(NCBI参考序列号：NC_007312.4)第22830位、第44675位、第53423位的单核苷酸多态性。

2.根据权利要求1所述的检测黄牛FBXO32基因单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述的PCR扩增反应程序为：

94℃预变性5min；

34个循环：94℃变性30s，T_m(分别为66℃，58.5℃，64.7℃)退火30s，72℃延伸30s；

72℃延伸10min。

3.根据权利要求1所述的检测黄牛FBXO32基因单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述的琼脂糖凝胶的质量浓度分别为3.5％、2.0％、2.0％。

4.根据权利要求1所述的检测黄牛FBXO32基因单核苷酸多态性的方法，其特征在于，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定黄牛FBXO32基因第22830位的单核苷酸多态性为：AA基因型表现为长度为131bp的一条带；AG基因型表现为长度分别为131bp、110bp和21bp的三条带；GG基因型表现为长度分别为110bp和21bp的两条带。

5.根据权利要求1所述的检测黄牛FBXO32基因单核苷酸多态性的方法，第44675位的单核苷酸多态性为：TT基因型表现为长度为331bp的一条带；TC基因型表现为长度分别为331bp、257bp和74bp的三条带；CC基因型表现为长度分别为257bp和74bp的两条带。

6.根据权利要求1所述的检测黄牛FBXO32基因单核苷酸多态性的方法，第53423位的单核苷酸多态性为：GG基因型表现为长度为587bp的一条带；AG基因型表现为长度分别为587bp、450bp和137bp的三条带；AA基因型表现为长度分别为450bp和137bp的两条带。

7.根据权利要求1至6中任意一项权利要求所述的检测黄牛FBXO32基因单核苷酸多态性的方法在鉴定不同黄牛群体多态性中的诊断应用。

8.根据权利要求7所述的诊断应用，其特征在于，鉴定不同黄牛多态性，黄牛FBXO32基因第22830位和第53423位的SNP作为在黄牛分子育种中辅助选择的分子标记，第44675位的CC基因型为提高黄牛体斜长、胸围、坐骨端宽和日增重的候选分子遗传标记。