[发明专利]白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及中药材指纹图谱的构建方法，尤其是白头翁药材高效液相色谱（HPLC）指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。属于药物分析技术领域。 

背景技术

白头翁PULSATILLAE RADIX出自《神农本草经》、《别录》：“白头翁生高山山谷及田野”，为毛莨科植物Pulsatilla chinensis(Bge.)Regel的干燥根，多年生草本。别名有奈何草、粉乳草、白头草、老姑草、菊菊苗、老翁花、老冠花、猫爪子花等等。白头翁主产于内蒙古、辽宁、河北，此外河南、山东、吉林、安徽、江苏、陕西、山西、黑龙江等等地亦产（中华人民共和国药典（一部）[S].中国医药科技出版社:北京，2010：96；刘佃全，王众国.白头翁的种类和鉴别[J].山东医药工业，1998，17(5)：14-15.）。 

白头翁具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫之功效,临床主要用于治疗阿米巴痢疾、细菌性痢疾、阴道滴虫和下痢脓血等。现代药理研究发现白头翁具有抗肿瘤、增强免疫功能、抗炎、抗病原微生物、抗寄生虫、保肝、毒性及治疗内毒素血症等作用。从历代本草专著（如《蜀本草》、《开宝本草》、《本草衍义》等）可以看出白头翁药用价值高，中医认为，白头翁有清热解毒、凉血、明目、消赘的功效（时维静，李立顺，董卫星.白头翁化学成分、药理作用及临床应用研究进展[J].中兽医医药杂志，2009(4):22-24；舒莹，韩广轩，刘文庸，等.中药白头翁的药材、化学成分和药理作用的研究[J].药学实践杂志，2000，18(6):387-389；俞浩.白头翁药理作用研究进展[J].中国兽药杂志，2006，40(7):51-54.）。 

目前我国对白头翁的质量控制主要局限于对主要成分的含量测定，而《中国药典》对白头翁的质量评价方式单一。不足以系统、完整的表明白 头翁药材的整体质量，急需探索更先进、更有效的质量控制手段。而HPLC指纹图谱建立对鉴别与控制含有白头翁药味的复方和白头翁药材的质量具有重要意义。近两年已有三篇类似文章发表：方艳夕(方艳夕，潘勇，秦梅颂,等.白头翁高效液相色谱指纹图谱研究[J].宜春学院学报,2011,33(12):130-133.)等的建立了不同产地白头翁的HPLC指纹图谱，十批次药材指纹图谱中仅九批次相似度大于0.9，分析时间60min；李海燕（李海燕，李宏博，郝宁,等.白头翁属药用植物的HPLC指纹特征与化学分类研究[J].中国中药杂志,2011,36(11):1478-1482；李海燕，李宏博，郝宁,等.朝鲜白头翁指纹图谱的高效液相色谱测定[J].时珍国医国药,2012,23(2):307-309.）等建立了白头翁属的5种药用植物(朝鲜白头翁，蒙古白头翁、白头翁、兴安白头翁、细叶白头翁)皂苷类成分的HPLC指纹特征图谱，以及朝鲜白头翁药材的HPLC指纹图谱，分析时间80min，以上5个不同品种白头翁属药用植物在理化性质、药效上均有差异，所制定的质量标准不符合药典规定，不是真正意义上药典规定的白头翁药材指纹图谱。 

发明内容

本发明按照新药研发中药材指纹图谱研究的技术要求，对固定品种、药用部位、产地、采收期、产地加工方法的白头翁药材进行HPLC指纹图谱的研究。所建立的白头翁药材HPLC指纹图谱的色谱周期较上述三篇报道缩短一半，且在基线平稳性、色谱峰分离度、峰形也显示出明显的优越性。 

因此，本发明在于提供一种白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的白头翁药材标准指纹图谱。为实现此目的，本发明通过对白头翁药材高效液相色谱指纹图谱的研究，提出了一种更好的白头翁药材质量控制方法，弥补了现有质量控制技术的不足，使白头翁药材的质量控制更加完善和科学。 

因此本发明的第一个目的是提供一种白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，所述方法包括以下步骤： 

（1）制备对照品溶液：精密配制白头翁皂苷B₄对照品溶液，浓度优选为20~500μg/mL； 

（2）制备供试品溶液：精密称取白头翁药材粉末，优选为0.1~10g，进行提取，提取液用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液； 

（3）采用高效液相色谱法进行测定得到指纹图谱，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱；紫外检测波长：200nm~400nm检测； 

（4）评价相似度：供试品指纹图谱采用国家药典委员会出版的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版进行评价。 

以下具体描述以上各步骤。 

（1）对照品溶液的制备：