[发明专利]白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

权利要求书

1.白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，所述方法包括以下步骤：

(1)制备对照品溶液：配制白头翁皂苷B₄对照品溶液；

(2)制备供试品溶液：称取白头翁药材，进行提取，提取液用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；

(3)采用高效液相色谱法进行测定得到指纹图谱，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱；紫外检测波长：200nm～400nm检测；

(4)评价相似度：供试品指纹图谱采用国家药典委员会出版的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版进行评价。

2.根据权利要求1所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(1)中所述B₄对照品溶液的浓度为20～500μg/mL。

3.根据权利要求1所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(2)中所述白头翁药材的称重量为0.1～10g。

4.根据权利要求1所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(2)中所述提取步骤为采用40％～80％乙醇提取；再采用超声提取，提取时间为10～60min。

5.根据权利要求1所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(2)中所述白头翁药材产自河北。

6.根据权利要求1所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(3)中所述微孔滤膜孔径为0.2μm～0.8μm。

7.根据权利要求1所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(3)中所述梯度洗脱的流动相为0.01～3％的磷酸水溶液与乙腈组成的梯度洗脱液；梯度洗脱时间为20～180min，流速0.3～2.0ml/min；柱温20～45℃。

8.如权利要求7所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(3)中所述梯度洗脱的洗脱程序以如以下浓度配制进行：0min→8min→9min→12min→24min→30min，乙腈8％→11％→15％→16％→25％→30％。

9.根据权利要求1所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(3)所述测定中，高效液相色谱仪自动进样器进样0.5～20μl。

10.根据权利要求1所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤(4)所述评价相似度中，供试品指纹图谱在200nm～400nm检测波长下的相似度均大于0.90。

11.根据权利要求1-10任一项所述的白头翁药材HPLC指纹图谱的建立方法所测得的白头翁药材标准指纹图谱，其特征在于：指纹图谱中有29个共有峰，保留时间分别为：0.6min、0.7min、1.0min、1.4min、1.8min、2.2min、2.6min、3.6min、4.0min、4.4min、5.0min、5.2min、6.8min、8.2min、10.0min、11.7min、12.1min、12.9min、16.5min、17.2min、17.8min、21.9min、22.3min、22.7min、24.1min、24.5min、25.3min、27.5min、28.4min峰号依次记为1-29号，以19号峰作为参比峰，峰号(相对保留时间)分别为：1(0.033)，2(0.041)，3(0.059)，4(0.082)，5(0.111)，6(0.130)，7(0.155)，8(0.220)，9(0.244)，10(0.265)，11(0.302)，12(0.317)，13(0.408)，14(0.494)，15(0.604)，16(0.708)，17(0.730)，18(0.782)，19(1.000)，20(1.042)，21(1.076)，22(1.322)，23(1.347)，24(1.373)，25(1.460)，26(1.482)，27(1.528)，28(1.661)，29(1.720)；其中峰28为白头翁皂苷B₄。

12.根据权利要求11所述的白头翁药材HPLC指纹图谱，其特征在于：所述29个共有峰中，单峰面积占总峰面积大于5％，而小于10％的共有峰为峰1、峰18；单峰面积占总峰面积大于10％的共有峰为峰2、峰28；其余色谱峰峰面积均小于5％。