[发明专利]三种菌的三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌三重实时荧光PCR检测引物，其特征在于，所述的检测引物如下所示：

针对aceA基因：

5`-TCACCGAAAGACCAACAGAAG-3`；

5`-GAACTCGCTGAAATGAGCAG-3`；

针对肠炎沙门氏菌特异序列：

5`-CTCATTCTGACCTCTAAGCCG-3`；

5`-TCTGGTACTTACGATGACAACTTC-3`；

针对鼠伤寒沙门氏菌STM4599序列：

5`-ATTTCTGGATATGGTACTGAGGC-3`；

5`-AAATGAGTTGCTTTACGCTGC-3`。

2.一种沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌三重实时荧光PCR检测探针，其特征在于，所述的检测探针如下所示：

aceA基因的探针：5`-TGGCAGGAGAAGTACCCACAGG-3`；

肠炎沙门氏菌特异序列的探针：5`-CTGGCGAATGGTGAGCAGACAAC-3`；

鼠伤寒沙门氏菌STM4599序列的探针：5`-CGGGATTAATGTGCACTCCGGTTGTA-3`；

探针的5`端标记有荧光报告基团，3`端标记有荧光淬灭基团，三探针的5`端标记的荧光报告基团是不同的荧光报告基团。

3.根据权利要求2所述的沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌三重实时荧光PCR检测探针，其特征在于，所述的荧光报告基因为FAM、VIC或cy5，所述的荧光淬灭基团为TAMARA或BHQ2。

4.一种沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌三重实时荧光PCR检测试剂盒，包括实时荧光PCR反应液、UNG酶、耐热DNA聚合酶、检测引物和检测探针，其特征在于，所述的检测引物包括三对：

（1）针对aceA基因：

5`-TCACCGAAAGACCAACAGAAG-3`；

5`-GAACTCGCTGAAATGAGCAG-3`；

（2）针对肠炎沙门氏菌特异序列：

5`-CTCATTCTGACCTCTAAGCCG-3`；

5`-TCTGGTACTTACGATGACAACTTC-3`；

（3）针对鼠伤寒沙门氏菌STM4599序列：

5`-ATTTCTGGATATGGTACTGAGGC-3`；

5`-AAATGAGTTGCTTTACGCTGC-3`；

所述的检测探针包括：

（1）aceA基因的探针：5`-TGGCAGGAGAAGTACCCACAGG-3`；

（2）肠炎沙门氏菌特异序列的探针：5`-CTGGCGAATGGTGAGCAGACAAC-3`；

（3）鼠伤寒沙门氏菌STM4599序列的探针：

5`-CGGGATTAATGTGCACTCCGGTTGTA-3`；

探针的5`端标记有荧光报告基团，3`端标记有荧光淬灭基团，三探针的5`端标记的荧光报告基团是不同的荧光报告基团。

5.一种沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌三重实时荧光PCR检测方法，用于检测食品或海产品，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对样品进行增菌培养，提取增菌液中菌体的基因组DNA作为模板；

（2）使用权利要求1所述的针对aceA基因、肠炎沙门氏菌特异序列和鼠伤寒沙门氏菌STM4599序列的检测引物及权利要求2所述的检测探针，与实时荧光PCR扩增用的反应液、UNG酶及耐热DNA聚合酶混合形成扩增反应体系；

（3）将扩增反应体系在荧光PCR仪上进行实时荧光PCR反应，反应结束后，根据探针标记的荧光报告基团记录的荧光信号，读取并记录各检测样品的PCR扩增循环次数（Ct）；

（4）根据各样品的Ct值，按照建立的标准曲线，判断样品中是否含有沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌。