[发明专利]蛇毒神经生长因子活性多肽的筛选方法

权利要求书

1.蛇毒神经生长因子活性多肽的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

一、融合蛋白质的构建：选择活化的重组蛇毒神经生长因子，以vNGF为模板，进行功能区域断点分析，然后通过PCR引物法构建至少两个不同长度、不同组合的片段序列，并作标记；

二、质粒表达系统的构建：将上述片段序列分别组装在pBluscriptII SK+质粒中，构建vNGF的转移载体，并使其在DH5a中克隆，形成活性多肽质粒转移系统，然后利用单一酶切点的黏性末端连接方法将具有相同黏性末端的至少两个不同长度的基因片段和目的片段连接，分别组装在pQE30质粒的BamHI和HindIII酶切位点之间，克隆并表达vNGF的活性多肽；

三、通过6X组氨酸回收提纯技术进行分离、鉴定、提纯，形成vNGF活性多肽的刺激物原液；

四、验证原核表达vNGFβ片段的生物活性，进行多肽筛选。

2.如权利要求1所述蛇毒神经生长因子活性多肽的筛选方法，其特征在于：

所述片段序列为2个，分别为：vNGF F1片段，对应20-388基因位点，计369bp；vNGF F2片段，对应389-751基因位点，计363bp。

3.如权利要求1所述蛇毒神经生长因子活性多肽的筛选方法，其特征在于：

所述验证原核表达vNGF片段的生物活性的方法为：大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤培养检测法。