[发明专利]一种静脉注射用肝靶向白介素-12/壳聚糖纳米给药系统及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种靶向给药系统，具体涉及一种静脉注射用肝靶向白介素-12/壳聚糖纳米给药系统及其制备方法。

背景技术

白介素-12（Interleukin-12,IL-12）因其具有强大的抗肿瘤活性及抗转移作用而被广泛重视。然而，自从1997年报道了2例在Ⅱ期临床中静脉注射IL-12致死的病例以来(Leonard JP,et al.Effects of single-dose interleukin-12exposure on interleukin-12-associated toxicity and interferon-gamma production.Blood.1997;90:2541-8)IL-12临床应用至今停止不前。多年来，各国科学家一直在寻找降低其毒副作用的有效方法。壳聚糖（Chitosan，CS）作为一种具有生物相容性、可降解性、低毒性的聚阳离子天然高分子材料，且具有理化性质的可修饰性，近年来成为生物治疗载体的研究热。近期有学者通过制备IL-12/壳聚糖纳米粒注射液，提高了IL-12的生物利用率，成功抑制了小鼠膀胱内肿瘤的生长(Zaharoff DA,et al.Intravesical immunotherapy of superficial bladder cancer with chitosan/interleukin-12.Cancer Res.2009;69:6192-9.)。但这种瘤内注射的给药方式仅限于部分可触及肿瘤的局部治疗，系统性给药仍然面临靶向性差、毒副作用大的风险。

我国是肝脏疾病的高发区，因此研制新型肝靶向给药系统，可减少药物用量、降低毒副作用。肝靶向IL-12载体系统能通过肝内释放IL-12改善肝内免疫微环境，不仅能提高原发性肝癌的疗效，还能有效预防结直肠癌肝转移。肝靶向给药系统根据导向机理而论可分为被动靶向和主动靶向，前者指载药微粒被单核-巨噬细胞（尤其是肝的Kuffer细胞）摄取，通过正常生理过程运送到肝脏的治疗方法；而后者是指用“靶向分子”修饰的药物载体，如用去唾液酸糖蛋白受体介导的靶向药物。由于糖类分子能提高药物和肿瘤细胞的亲和力，有利于药物通过肿瘤细胞，因此壳聚糖作为一种多聚多糖阳离子，是肿瘤药物的最适宜载体之一。

中国专利CN101254308A公布了用甘草次酸-聚乙二醇修饰壳聚糖纳米粒的制备方法，该发明充分利用甘草次酸的高度肝靶向性，通过不同位点对其亲水改性制备成大分子复合物，实现了肝靶向定位，但没有提供该复合载药的肝内药物释放效率的详细资料。中国专利CN101766820A公布了用三聚磷酸负离子、戊二醛交联壳聚糖纳米粒，再将叶酸连接到该载体上。中国专利CN102225051A利用了羧甲基壳聚糖的pH敏感性及叶酸的肿瘤靶向性，制备了叶酸-羧甲基壳聚糖修饰pH敏感性纳米多柔比星（Doxorubicin）纳米脂质体。这类复合载体均利用了羧甲基壳聚糖pH敏感性的特性，由叶酸类靶向分子实现了肿瘤靶向的目的，但不具有肝靶向定位的功效。

发明内容

本发明的发明目的是提供一种静脉注射用肝靶向白介素-12/壳聚糖纳米给药系统，该载药系统根据被动肝靶向机制，筛选肝靶向性强的纳米球制备条件；利用修饰后纳米球的两性电解质性质制备pH敏感性载药系统。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种静脉注射用肝靶向白介素-12/壳聚糖纳米给药系统，它是以肝靶向化合物多聚磷酸钠-壳聚糖为载体材料，交联包埋白介素-12（IL-12）制成，纳米球粒径为200～500nm，载药率为2～25%；所述壳聚糖的脱乙酰度≥80%。

上述静脉注射用肝靶向白介素-12/壳聚糖纳米给药系统的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备多聚磷酸钠-壳聚糖修饰白介素-12纳米球：

分别配制浓度为1～5μg/mL的白介素-12水溶液和浓度为1～5mg/mL的壳聚糖醋酸溶液，壳聚糖的脱乙酰度≥80%，将上述两溶液以体积比1∶3～1∶6混匀，在磁力搅拌200～400r/min条件下，缓慢滴加浓度为0.5～1.6mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，加入的三聚磷酸钠溶液的总体积为白介素-12水溶液体积的0.5～4倍，获得白介素-12纳米球悬液；

(2)将步骤(1)获得的悬液加入醋酸-醋酸钠缓冲液中混匀，所述悬液和醋酸-醋酸钠缓冲液的体积比1∶1～1∶3为，用冰乙酸调节pH值至5.5～6.5间，均匀交联后微孔滤膜过滤，配制成多聚磷酸钠化学修饰的白介素-12壳聚糖纳米球悬液。