[发明专利]一种羰基还原酶、基因和突变体及在不对称还原羰基化合物中的应用

权利要求书

1.一种分离的蛋白质，其特征在于：其是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)在(a)的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有羰基还原酶活性的由(a)衍生的并和(a)的氨基酸序列至少62％相同的蛋白质。

2.如权利要求1所述的的蛋白质，其特征在于，所述的(b)蛋白质是在(a)的氨基酸序列的第85位、第92位、第94位、第99位和第174位氨基酸中的一位或多位经过取代一个氨基酸且具有羰基还原酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

3.一种分离的核酸，其特征在于：其是如下(1)或(2)的核酸：

(1)由序列表中SEQ ID No.1所示核苷酸序列组成的核酸；

(2)编码如下蛋白质(a)或(b)的基因：

(a)由序列表中SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)在(a)的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有羰基还原酶活性的由(a)衍生的并和(a)的氨基酸序列至少62％相同的蛋白质。

4.一种包含如权利要求3所述的核酸的重组表达载体。

5.一种包含如权利要求4所述的重组表达载体的重组表达转化体。

6.一种重组羰基还原酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：培养如权利要求5所述的重组表达转化体，从培养物中获得重组羰基还原酶。

7.一种如权利要求1～2任一项所述的蛋白质在催化前手性羰基化合物进行不对称还原反应形成手性醇中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的应用包括下述方法：在pH 5.5～7.0的水溶液中，在葡萄糖脱氢酶、葡萄糖和NADP⁺的存在下，在如权利要求1～2任一项所述的蛋白质的催化下，前手性羰基化合物进行不对称还原反应，形成光学活性手性醇。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述蛋白质用量为5～60kU/L，葡萄糖脱氢酶的用量为5～60kU/L，葡萄糖的用量为5～600g/L，NADP⁺的用量为0～0.5mmol/L，所述前手性羰基化合物的浓度为10mmol/L～2.0mol/L，所述pH 5.5～7.0的水溶液为磷酸盐缓冲液，反应温度为20～35℃。

10.如权利要求7～8任一项所述的应用，其特征在于，所述的前手性羰基化合物为如式1、2或3所示的化合物：

其中，R₁为烷基、苯基或带有取代基的苯基，苯基的取代基为卤素或烷基；

R₂为烷基；

R₃为烷基或卤代烷基；

R₄为卤代烷基。