[发明专利]一种食用安全性整合型螺旋藻高效表达载体及其应用技术

权利要求书

1.一种表达载体p21GZ，其特征在于该载体源于自杀型质粒pSZ21，在保留其中Tn5转座功能的基础上去除了Tn5中的抗性基因。

2.一种表达单元GAG，该表达单元包含串联的绿色荧光蛋白GFP基因、螺旋藻特异性启动子AP以及10拷贝促胰岛素编码基因10GLP-1。其特征在于，该表达单元以GFP作为报告基因，通过螺旋藻特异性启动子AP启动10拷贝促胰岛素的高效表达。

3.一种表达载体p21GZ-GAG，该表达载体通过将权利要求2所述表达单元GAG插入权利要求1所述载体p21GZ中获得。其特征在于该表达载体能够通过Tn5介导的转座整合进宿主基因组，可以GFP进行荧光筛选，特异性高效表达多拷贝促胰岛素GLP-1。

4.一种大肠杆菌菌株NK-Ec007，其特征在于，含有权利要求3所述的表达载体p21GZ-GAG。

5.一种含有如权利要求3所述表达载体p21GZ-GAG的大肠杆菌的构建方法，其特征在于，通过PCR扩增和酶切连接的方法获得权利要求1所述载体p21GZ和权利要求2所述的GAG表达单元，将GAG表达单元插入p21GZ中得到权利要求3所述的表达载体p21GZ-GAG，并将该表达载体转化大肠杆菌得到权利要求4所述菌种。

6.一种权利要求3所述方法获得表达载体的用途，其特征在于，用其转化螺旋藻可获得稳定高效表达多拷贝促胰岛素的螺旋藻藻(菌)株，不含抗生素筛选标记，该藻(菌)株可用于开发功能性保健品。