[发明专利]一种真核重组质粒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种真核重组质粒，其特征在于由序列表中SEQ ID NO.1所述人FBXL20基因的核苷酸序列中的CY-FBXL20片段与真核载体构建而成，所述CY-FBXL20片段是起始密码子下游10045bp至10063bp的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的真核重组质粒，其特征在于所述真核载体为GPU6、pGPH1、pGPU6/GFP/Neo、pGPU6/Neo、pGPH1/Neo、hU6-MCS-CMV-GFP-SV40-Neomycin、pGPU6/Hygro、pGPH1/Hygro、pGPU6/GFP/Neo、pGPH1/GFP/Neo、H1-MCS-CMV-GFP-SV40-Neomycin、CMV-EGFP-MCS(MIR30)-SV40-Neomycin、CMV-RFP-MCS(MIR30)-SV40-Neomycin中的一种。

3.权利要求1或2所述真核重组质粒在制备治疗喉鳞癌的药物中的应用。

4.一种真核重组质粒的制备方法，其特征在于依次包括以下步骤：

(1)通过RNA固相合成法，获得人FBXL20基因中的CY-FBXL20片段的RNAi片段；

(2)将所述CY-FBXL20片段的RNAi片段插入到真核载体构建真核重组质粒，该插入片段的酶切位点分别为BamI和BbsI，再将所述真核重组质粒转化至感受态细菌中进行培养，然后筛选出含有正确插入片段的克隆；

(3)使用碱裂解法抽提所构建的真核重组质粒，利用限制性内切酶酶切图谱分析所构建的真核重组质粒，并进行DNA序列分析。

5.根据权利要求4所述真核重组质粒制备方法，其特征在于所述真核载体为GPU6、pGPH1、pGPU6/GFP/Neo、pGPU6/Neo、pGPH1/Neo、hU6-MCS-CMV-GFP-SV40-Neomycin、pGPU6/Hygro、pGPH1/Hygro、pGPU6/GFP/Neo、pGPH1/GFP/Neo、H1-MCS-CMV-GFP-SV40-Neomycin、CMV-EGFP-MCS(MIR30)-SV40-Neomycin、CMV-RFP-MCS(MIR30)-SV40-Neomycin中的一种。