[发明专利]一株反硝化聚磷细菌H-hrb02及其筛选方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种反硝化聚磷细菌H-hrb02及其应用效能，同时提供了这种细菌的筛选方法。

背景技术

当前，随着国民经济地迅速发展和城市化进程地不断深入，城市生活和工业废水的排放总量也在逐年增加。而农药、化肥和合成洗涤剂等的广泛使用，使得水体中的营养物质浓度不断升高，其中氮，磷是引起水体富营养化的主要原因之一。常规的生化处理工艺可以有效地降低污水中的BOD₅和SS，但当污水中同时存在的N，P等营养物的时候，只能去除污水中磷的10%-20%，大量含磷污水将直接排入环境水体。

传统的生物脱氮除磷工艺存在着自身难以解决的矛盾：聚磷菌和反硝化菌对碳源的竞争始终存在；聚磷菌、硝化菌和反硝化菌世代周期不同，菌群的混合会相互制约，系统很难达到最佳的处理效果。反硝化聚磷菌DPB（Denitrification Phosphorus Removal Bacteria）的发现使脱氮除磷工艺有了更为广阔的发展前景。一旦在污水处理工艺当中引入这类具有反硝化功能的PAOs，将会对生物除磷的技术革新产生十分重要的意义。目前，在兼性厌氧反硝化聚磷菌的特性研究为基础的前提下，开展了以生物体内储存的聚羟基烷酸（PHA）为碳源的新工艺及反硝化聚磷菌与硝化菌相分离的双污泥系统的研究，这些研究越来越受到学者的重视。

到目前为止，反硝化聚磷菌株主要集中在Pseudomonas菌属和Bacillus菌属，菌种较为单一，且研究多集中在降解基因和降解机理方面，实际应用研究有限。因此，从自然界筛选出对具有高效反硝化除磷效能的菌株Pseudomonasaeruginosa strain H-hrb02，对其生理生化特性及其脱氮除磷效能能进行深入的研究都是必需的，具有重要的现实意义和实际应用价值。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种反硝化聚磷细菌H-hrb02及其筛选方法中其DNA的PCR扩增过程。

本发明的目的之二在于提供该菌株H-hrb02在水处理中的应用效能。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株反硝化聚磷细菌H-hrb02，其特征在于其为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）H-hrb02，属于假单胞菌属（Pseudomonas），已在中国微生物菌种保藏中心保藏，保藏日期为2012年03月27日，保藏编号为CGMCC NO.5940。本发明所提供的反硝化聚磷菌株Pseudomonasaeruginosa strain H-hrb02，经鉴定为革兰氏阴性杆菌，专性需氧菌（在硝酸盐培养基中除外），生长温度范围25-42℃，最适生长温度为25-30℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长，菌体长度为1.5-5.0                                                m，宽度为0.5-1m，细长且长短不一，呈球杆状或线状，成对或短链状排列，菌体一端有单鞭毛，无芽孢。

反硝化聚磷细菌H-hrb02的筛选方法，常规提取反硝化聚磷细菌的DNA后，DNA经PCR扩增，得到反硝化聚磷菌基因的碱基序列，PCR扩增过程的具体步骤为：

a. PCR体系建立（25μL）：

10×PCR Buffer                            2.5μL

dNTPs（浓度为2.5mmol/L）           2μL

引物1                                        0.5μL

引物2                                        0.5μL

DNA模板                                   0.5μL

rTaq DNA聚合酶（5U/μL）           0.5μL

加无菌去离子水至                        25μL

b. PCR程序设定：

预变性 95℃3min

95℃预变性5min, 94℃变性1min, 58℃复性30s, 72℃延伸3min, 共30个循环,最后72℃延伸10min；

c.引物序列：

引物1     5’-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’