[发明专利]一株反硝化聚磷细菌H-hrb02及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一株反硝化聚磷细菌H-hrb02，其特征在于其为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）H-hrb02，属于假单胞菌属（Pseudomonas），已在中国微生物菌种保藏中心保藏，保藏日期为2012年03月27日，保藏编号为CGMCC NO.5940。

2.根据权利要求1所述的反硝化聚磷细菌H-hrb02，其特征在于菌株Pseudomonasaeruginosa strain H-hrb02经鉴定为革兰氏阴性杆菌，专性需氧菌（在硝酸盐培养基中除外），生长温度范围25-42℃，最适生长温度为25-30℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长，菌体长度为1.5-5.0                                               m，宽度为0.5-1m，呈球杆状或线状，成对或短链状排列，菌体一端有单鞭毛，无芽孢。

3.根据权利要求1或2所述的反硝化聚磷细菌H-hrb02的筛选方法，常规提取反硝化聚磷细菌的DNA后，DNA经PCR扩增，得到反硝化聚磷菌基因的碱基序列，其特征在于PCR扩增过程的具体步骤为：

a. PCR体系建立（25μL）：

10×PCR Buffer                      2.5μL

dNTPs（浓度为2.5mmol/L）           2μL

引物1                              0.5μL

引物2                              0.5μL

DNA模板                           0.5μL

rTaq DNA聚合酶（5U/μL）           0.5μL

加无菌去离子水至                    25μL

b. PCR程序设定：

预变性 95℃3min

95℃预变性5min, 94℃变性1min, 58℃复性30s, 72℃延伸3min, 共30个循环,最后72℃延伸10min；

c.引物序列：

引物1     5’-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’

引物2     5’-AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’。

4.根据权利要求1或2所述的反硝化聚磷细菌H-hrb02在含氮磷废水处理中的脱氮除磷效能应用。

5.根据权利要求4所述的反硝化聚磷细菌H-hrb02的脱氮除磷效能应用，其特征在于处理方法为：挑取H-hrb02菌落，富集24小时后，以每1L水样接种100ml菌液的比例接种至缺磷培养基和富磷培养基中，培养时间为80小时；

所述缺磷培养基的配制如下（PO₄^3--P为4mg/L）：CH₃COONa 3.23g/L，Na₂HPO₄·2H₂O 23mg/L，NH₄Cl 152.8mg/L，MgSO₄·7H₂O 81.12mg/L，K₂SO₄ 17.83mg/L，CaCl₂·2H₂O 11mg/L，HEPES buffer 7g/L，微量元素 2ml/L，琼脂 15g/L，H₂O 1000ml，pH 7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min；

所述富磷培养基的配制如下（PO₄^3--P为8mg/L）：CH₃COONa 3.23g/L，KH₃PO₄ 25mg/L，NH₄Cl 305.52mg/L，MgSO₄·7H₂O 91.26mg/L，CaCl₂·2H₂O 25.68mg/L，PIPES buffer 8.5g/L，微量元素 2ml/L，琼脂 15g/L，H₂O 1000ml，pH 7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min；

所述微量元素的配制如下：FeCl₃ 0.90g/L，H₃BO₃ 0.15g/L，CuSO₄·5H₂O 0.03g/L，KI 0.18g/L，MnCl₂·4H₂O 0.06g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.12g/L，CoCl₂ 0.15g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.06g/L，EDTA 10.00g/L。