[发明专利]一种提取植物DNA的方法及其专用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取植物DNA的方法及其专用试剂盒。

背景技术

DNA是植物的基本遗传物质，是植物遗传信息的载体。一定量及高质量的DNA样品是进行限制性酶切、PCR扩增、分子杂交、遗传多态性分析以及基因组学等分子生物学研究的基础。因此，如何获取一定量及高质量的DNA样品显得极为重要。

植物细胞有细胞壁，含有较多的多糖等次生代谢物，而且不同植物中次生代谢产物的种类和含量差异很大，有时同种植物不同器官或组织的此生代谢物的种类和含量也不一样，导致获取高质量的DNA有一定的难度。针对某种特殊物种优化的DNA提取方法不一定适用于其他物种。传统CTAB法是目前应用最多的DNA提取方法，但由于植物材料化学成分、组织结构等差异，传统的CTAB法的提取效果有时欠佳，在使用上受到一定的限制。因此迫切需要一种简便、高效、经济且通用性较好的植物DNA提取方法。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种提取植物DNA的方法及其专用试剂盒。

本发明所提供的用于提取植物DNA的试剂盒，包括缓冲液A；所述缓冲液A由溶质及溶剂组成；所述溶质及其在所述缓冲液A中的终浓度如下：乙二胺四乙酸二钠4-6mmol·L^-1，NaCl 0.2-0.3M，聚乙烯基吡咯烷酮1-3g/100ml；浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液8-12ml/100ml；所述溶剂为水。

上述试剂盒中还可包括缓冲液B；所述缓冲液B由溶质及溶剂组成：所述溶质及其在所述缓冲液B中的终浓度如下：浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液8-12ml/100ml，乙二胺四乙酸二钠20-30mmol·L^-1，NaCl 1.2-1.6M，CTAB2.5-3.5g/100ml，偏亚硫酸氢钠0.5-1.5g/100ml，抗坏血酸钠0.5-1.5g/100ml，聚乙烯基吡咯烷酮1-3g/100ml，β-巯基乙醇80-120ul/100ml；所述溶剂为水。

上述任一所述试剂盒中，所述缓冲液A具体可为如下：所述溶质及其在所述缓冲液A中的终浓度如下：乙二胺四乙酸二钠5mmol·L^-1，NaCl 0.25M，聚乙烯基吡咯烷酮2g/100ml；浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液10ml/100ml；

上述任一所述试剂盒中，所述缓冲液B具体可为如下：所述溶质及其在所述缓冲液B中的终浓度如下：浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液10ml/100ml，乙二胺四乙酸二钠25mmol·L^-1，NaCl 1.4M，CTAB 3g/100ml，偏亚硫酸氢钠1g/100ml，抗坏血酸钠1g/100ml，聚乙烯基吡咯烷酮2g/100ml，β-巯基乙醇100ul/100ml。

本发明所提供的提取植物DNA的方法，包括如下步骤：

(1)将缓冲液A与植物组织粉末混匀，冰浴，离心，弃上清，收集沉淀；

(2)将缓冲液B与步骤(1)所得沉淀混匀，放置，离心，收集上清液；

(3)用氯仿异戊醇溶液从步骤(2)中所得上清液中提取DNA，再进行去RNA及沉淀DNA的步骤，得到目的DNA；

所述缓冲液A和所述缓冲液B均为上述任一所述试剂盒中的缓冲液A和缓冲液B。

上述方法中，所述步骤(1)中，冰浴的时间为10min-20min。

上述方法中，所述步骤(2)中，所述放置的方法为60℃-70℃水浴90-120min，具体为65℃水浴100min。

上述方法中，在所述步骤(1)之后，所述步骤(2)之前，还包括如下重复步骤：将上一步骤所得沉淀与所述缓冲液A混匀，冰浴，离心，弃上清，收集沉淀；直到上清不粘稠。

上述方法中，所述步骤(1)中，所述缓冲液A与植物组织粉末的配比为1mL缓冲液A：20mg植物组织粉末；所述冰浴过程中颠倒混匀2-3次；所述离心为7000×g离心10min；所述冰浴的时间为15min；

上述方法中，所述步骤(2)中，所述缓冲液B与所述植物组织粉末的配比为0.7mL缓冲液B：20mg植物组织粉末；所述水浴过程中颠倒混匀数次；所述离心为10000×g离心10min。