[发明专利]一种提取植物DNA的方法及其专用试剂盒

权利要求书

1.一种用于提取植物DNA的试剂盒，其特征在于：试剂盒包括缓冲液A；

所述缓冲液A由溶质及溶剂组成；所述溶质及其在所述缓冲液A中的终浓度如下：乙二胺四乙酸二钠4-6mmol·L^-1，NaCl 0.2-0.3M，聚乙烯基吡咯烷酮1-3g/100ml；浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液8-12ml/100ml；所述溶剂为水。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括缓冲液B；所述缓冲液B由溶质及溶剂组成：所述溶质及其在所述缓冲液B中的终浓度如下：浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液8-12ml/100ml，乙二胺四乙酸二钠20-30mmol·L^-1，NaCl 1.2-1.6M，CTAB 2.5-3.5g/100ml，偏亚硫酸氢钠0.5-1.5g/100ml，抗坏血酸钠0.5-1.5g/100ml，聚乙烯基吡咯烷酮1-3g/100ml，β-巯基乙醇80-120ul/100ml；所述溶剂为水。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液A中，所述溶质及其在所述缓冲液A中的终浓度如下：乙二胺四乙酸二钠5mmol·L^-1，NaCl 0.25M，聚乙烯基吡咯烷酮2g/100ml；浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液10ml/100ml；

所述缓冲液B中，所述溶质及其在所述缓冲液B中的终浓度如下：浓度为1M且pH为8.0的Tris-HCl缓冲液10ml/100ml，乙二胺四乙酸二钠25mmol·L^-1，NaCl 1.4M，CTAB 3g/100ml，偏亚硫酸氢钠1g/100ml，抗坏血酸钠1g/100ml，聚乙烯基吡咯烷酮2g/100ml，β-巯基乙醇100ul/100ml。

4.一种提取植物DNA的方法，包括如下步骤：

(1)将缓冲液A与植物组织粉末混匀，冰浴，离心，弃上清，收集沉淀；

(2)将缓冲液B与步骤(1)所得沉淀混匀，放置，离心，收集上清液；

(3)用氯仿异戊醇溶液从步骤(2)中所得上清液中提取DNA，再进行去RNA及沉淀DNA的步骤，得到目的DNA；

所述缓冲液A和所述缓冲液B均为权利要求1-3中任一所述试剂盒中的缓冲液A和缓冲液B。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，冰浴的时间为10min-20min。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述放置的方法为60℃-70℃水浴90-120min，具体为65℃水浴100min。

7.根据权利要求4-6中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述步骤(1)之后，所述步骤(2)之前，还包括如下重复步骤：将上一步骤所得沉淀与所述缓冲液A混匀，冰浴，离心，弃上清，收集沉淀；直到上清不粘稠。