[发明专利]一种靶向长循环的高分子脂质体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种靶向长循环的高分子脂质体及其制备方法，属于药物技术领域。

背景技术

脂质体是单层或多层脂质双分子膜以同心圆的形式包封而成的微球体。由于脂质体的膜材与细胞膜的成分很相似，因此与细胞的亲和能力较强，可通过内吞作用被细胞吞噬，或通过与细胞膜的融合作用进入细胞。将一些不稳定、易氧化的药物包封在脂质体中，不仅可以保护药物在进入病灶部位前免受机体酶的分解，提高其稳定性，而且可以保持药物在血液中的有效浓度，实现长期持续的释放，因此脂质体在药物载体和基因载体领域受到越来越广泛的关注。

但是以卵磷脂和胆固醇制备的常规脂质体在体内多被网状内皮系统(reticuloendothelial system，RES)吞噬，在血液循环中驻留时间较短。并且其物理化学稳定性差，储存和应用过程中容易发生融合聚集，疏水性药物包封率低，包封药物容易泄漏；表面官能团少，不易进行功能修饰，无靶向性、功能单一等。因此，开发新型脂质体的研究备受关注。

专利CN102058534A使用一种双亲性高分子γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐(OQPGA)，代替传统脂质体中的组分卵磷脂，与胆固醇组装制得了一种新型的高分子脂质体。该脂质体原料易得、组装简便，长期放置仍然具有稳定的粒径和电位。但是该脂质体在生理条件下具有较强的正电性，在正常细胞和病变细胞均有分布，缺少对病灶部位的靶向性，而且容易被网状内皮系统(reticuloendothelial system，RES)捕捉，在血液循环中的驻留时间较短。

聚乙二醇(PEG)是一种常用的药用辅料，良好的水溶性使得其常常作为难溶药物的助溶剂从而增加药物的体内生物利用度，而且PEG可以延长药物在体内的释放时间，主药与PEG组成的耦合体进入体内会因酶的作用而慢慢降解，主药从PEG的羟基上缓慢脱落进入血液循环从而可延时释放。α_vβ₃整合素在各种肿瘤细胞及新生血管内皮细胞上有高表达，RGD多肽可特异性地识别这些整合蛋白受体，从而提高对肿瘤部位的靶向性。将RGD肽连接在药物载体上不仅可以使药物集中在病灶部位发生作用，而且可以降低使用剂量，减少药物的毒副作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种表面正电位低，粒径均匀同时具有靶向和长循环功能的新型高分子脂质体及其制备方法，这种高分子脂质体表面带有PEG和RGD多肽。

本发明首先对γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐(OQPGA)进行修饰，将PEG和RGD肽连接到聚合物上，然后将功能化后的OQPGA与胆固醇通过反相蒸发法或薄膜分散法组装，制备得到这种新型高分子脂质体。如图3透射照片所示，其粒径均匀，分散性好，且具有明显的层状脂质体结构。如图4粒度测试结果所示，其有效粒径为99.8nm，且多分散度较小。如图5的Zeta电位分析图所示，该脂质体具有较低的Zeta正电位。

本发明的技术方案如下：

一种靶向长循环的高分子脂质体，其特征是：PEG修饰的γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐和RGD肽修饰的γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐，共同和胆固醇组装得到的阳离子高分子脂质体，其粒径在80nm～150nm之间，表面Zeta电位为5～7mV。

PEG修饰的γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐，其特征是将PEG接枝到γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐的侧链上，制备步骤如下：

a.将γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐和PEG-2000以质量比为2～4溶解在二氯甲烷里，室温搅拌至固体溶解；

b.向上述溶液中加入质量为PEG-2000的1.1～1.5倍的二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应24～48小时；

c.将上述反应液减压抽滤除去悬浮固体后，用截留分子量为8000～14000的透析袋透析1～2天后真空冻干，即得到纯化的PEG修饰的γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐。

RGD肽修饰的γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐，其特征是将RGD接枝到γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐的侧链上，制备步骤如下：

a.将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺加入到γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐的二氯甲烷溶液中，二者与γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐的质量比分别为1～4和0.25～2，室温搅拌18～24小时；

b.用旋转蒸发仪除去反应液中的二氯甲烷后，加入乙腈使其溶解，向体系中加入RGD肽，室温下搅拌反应1～3天；

c.将得到的反应液用截留分子量为8000～14000的透析袋透析2～4天后真空冻干，即得到RGD肽修饰的γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐。