[发明专利]阿克尼茄素B和E的分离制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然植物提取技术领域，涉及阿克尼茄素B和E的分离制备方法。

背景技术

阿克尼茄素B（Acnistin B）分子式为C₂₈H₃₆O₅，分子量为452.59；阿克尼茄素E（Acnistin E）分子式为C₂₈H₃₈O₇，分子量为486.61，均为甾体类化合物。主要分布于茄科植物中，如枝花阿克尼茄树Acnistus ramiflorum Miers.叶、Dunalia solanacea H.B.K.叶中。阿克尼茄素B和阿克尼茄素E均具有免疫抑制作用，对人淋巴细胞测试表明，能抑制³H-胸苷的摄入，在剂量为1μg/mL时，抑制率分别为80%和77%。阿克尼茄素E还具有抗肿瘤作用，对P388细胞呈边缘活性。

目前尚未检索到利用超临界流体萃取方法同时制备阿克尼茄素B和E的方法报道。

发明内容

本发明的目的是提供阿克尼茄素B和E的分离制备方法，该方法可制备得到高纯度的阿克尼茄素B和E。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

阿克尼茄素B和E的分离制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A.超临界萃取：将药材采用超临界CO₂流体萃取，以50-80%乙醇为夹带剂，萃取3-6小时，收集萃取物；B.溶剂萃取：将萃取物用正丁醇萃取，得到正丁醇萃取物；C.脱色：将正丁醇萃取物过D941大孔树脂柱，收集下注液；D.色谱柱层析：将下注液减压浓缩，过中压硅胶柱分离，二氯甲烷-甲醇洗脱，分段收集洗脱液，分别得到阿克尼茄素B和阿克尼茄素E；E.结晶：回收收集的洗脱液中的溶剂，再采用乙醇、石油醚-乙酸乙酯或二氯甲烷-甲醇混合溶剂重结晶，分别得到阿克尼茄素B和阿克尼茄素E。

步骤A中所述超临界CO₂萃取压力为28-35MPa，萃取温度为35-55℃，分离釜压力为5-7MPa，分离温度为25-45℃。

步骤D中所述二氯甲烷-甲醇洗脱按二氯甲烷-甲醇体积比20:1-4:1进行梯度洗脱。

本发明的优势在于：本发明采用超临界CO₂处理条件较温和，实现对植物有效成分的初级分离，提高提取率，环境污染小、提率高、生产周期短，参数易于控制，便于工业化生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

    将Dunalia solanacea 叶干燥并粉碎至60目后置入超临界萃取釜中，用超临界CO₂夹带60%乙醇进行预处理，动态萃取，控制萃取釜压力19.2MPa，萃取温度48℃，分离压力6MPa，分离温度38℃，时间为3.5h后停止，收集萃取物，用正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取物过D941大孔树脂柱，收集下注液，将下注液减压浓缩后加少量硅胶拌匀低温烘干，装入中压硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，其中二氯甲烷-甲醇的体积比为20:1-4:1，在洗脱过程中，以HPLC在线监测定位，分段收集洗脱液，依次得到阿克尼茄素E和阿克尼茄素B的洗脱液，回收收集的各洗脱液中的溶剂，然后用乙醇对阿克尼茄素E进行结晶，得到阿克尼茄素E，用石油醚-乙酸乙酯对阿克尼茄素B进行结晶得到阿克尼茄素B晶体。

实施例2：

    将Dunalia solanacea 叶干燥并粉碎至60目后置入超临界萃取釜中，用超临界CO₂夹带60%乙醇进行预处理，动态萃取，控制萃取釜压力22.6MPa，萃取温度50℃，分离压力6MPa，分离温度42℃，时间为6h后停止，收集萃取物，用正丁醇萃取，得到的正丁醇萃取物过D941大孔树脂柱，收集下注液，将下注液减压浓缩后加少量硅胶拌匀低温烘干，装入中压硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，其中二氯甲烷-甲醇的体积比为20:1-4:1，在洗脱过程中，以HPLC在线监测定位，分段收集洗脱液，依次得到阿克尼茄素E和阿克尼茄素B的洗脱液，回收收集的各洗脱液中的溶剂，然后用乙醇对阿克尼茄素E进行结晶，得到阿克尼茄素E，用石油醚-乙酸乙酯对阿克尼茄素B进行结晶得到阿克尼茄素B晶体。

实施例3：