[发明专利]RecA介导的特异性目的DNA片段捕获方法无效
| 申请号： | 201210120141.8 | 申请日： | 2012-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN103374565A | 公开（公告）日： | 2013-10-30 |
| 发明（设计）人： | 于文强;张如奎 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 20043*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | reca 特异性 目的 dna 片段 捕获 方法 | ||
【权利要求书】：
1.RecA介导的特异性目的DNA片段捕获方法，其特征在于，在体外模拟RecA在体内同源重组中的作用模式，设计针对目的DNA片段的同源探针，通过RecA辅助探针和洗脱试剂，在含有RecA和ATP-γ-S的反应体系中特异性的捕获样品中的同源目标DNA片段。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的同源探针是针对目的DNA片段中58bp长度的同源探针。
3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的探针预先与RecA在37℃孵育，然后加入含有目标样品的DNA继续孵育，加入含有0.2％的NP40的1×RecA缓冲液洗涤非特异性DNA，最后通过洗脱试剂特异性地洗脱目的DNA片段。
4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的样品是经过酶切或超声将基因组断裂成500-1000bp的DNA片段。
5.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的洗脱试剂选自ATP或H2O。
6.按权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的洗涤非特异性的缓冲液中，含有Ca2+或Mg2+等二价阳离子。
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