[发明专利]一种促进美达霉素生物合成的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种促进抗生素美达霉素合成的基因工程菌AM-7161/pHSL56.2(Streptomyces nashvillensis AM-7161/pHSL56.2)，保藏号为CCTCC No：M 2012093。

2.一种促进抗生素美达霉素合成的基因工程菌用于美达霉素固体培养生产方法，其特征在于吸取权利要求1所述的工程菌AM-7161/pHSL56.2的孢子悬液接入固体R4产素培养基，进行30℃、5天的培养，用抗生素积累的颜色变化记录产素水平；收集固体培养物切成小块，用乙酸乙酯提取美达霉素；每升固体R4产素培养基配方为：琼脂粉15.0g，葡萄糖10.0g，酵母膏1.0g，酪蛋白水解物0.1g，K₂SO₄0.2g，MgCL₂·6H₂O 10.0g，TES 5.6g，微量元素溶液2毫升，CaCL₂·2H₂O 4.0g，其余为水，pH 7.2；培养基灭菌后添加硫链丝菌素终浓度为12.5μg/ml；微量元素溶液配方为：CaCL₂·2H2_O 4.0g/l，L-Proline 3.0g/l，其余为水，pH 7.2。

3.一种促进抗生素美达霉素合成的基因工程菌用于美达霉素液体培养生产方法，其特征在于吸取权利要求1所述的工程菌AM-7161/pHSL56.2的孢子悬液转入种子培养基中进行30℃、200转/分钟培养两天；将获得的种子培养物转接到液体R4产素培养基中，30℃、200转/分钟条件下培养4-7天，对发酵液进行离心，收集上清液，调整pH至中性，乙酸乙酯萃取后，用LC/MSn检测美达霉素产量；每升种子培养基配方：酵母膏1.0g，蛋白胨3.0g，牛肉膏3.0g，葡萄糖20.0g，NaCl 3.0g，CaCO₃10.0g，其余为水，pH 7.0；每升液体R4产素培养基配方为：葡萄糖10.0g，酵母膏1.0g，酪蛋白水解物0.1g，K₂SO₄0.2g，MgCL₂·6H₂O 10.0g，TES 5.6g，微量元素溶液2毫升，CaCL₂·2H₂O 4.0g，其余为水；培养基灭菌后添加硫链丝菌素终浓度为12.5μg/ml；微量元素溶液配方为：CaCL₂·2H₂O 4.0g/l，L-Proline 3.0g/l，其余为水，pH 7.2。

4.一种促进抗生素美达霉素合成的基因工程菌应用方法，其特征在于把含有链霉菌核糖体再循环因子的高效表达质粒pHSL56.2直接导入的链霉菌菌株还有能产生kalafungin的Streptomyces tanashiesis，或能产生nanaomycin的Streptomyces rosa，或能产生granaticin的Streptomyces olivaceus，或能产生frenolicin的Streptomyces fradiae，或能产生julimycin的Streptomyces shiodaensis，或能产生capoamycin及cyclacidin的Streptomyces capoamus。